脂肪酶在催化拆分對甲砜基苯絲氨酸乙酯中的應用.pdf

1、D-蘇式-對甲砜基苯絲氨酸乙酯,是氟苯尼考的重要合成中間體之一。目前制備對映體純的D-蘇式-對甲砜基苯絲氨酸乙酯的途徑大都為化學法途徑。以酶法手性拆分獲得對映體純的D-蘇式-對甲砜基苯絲氨酸乙酯在國內外幾乎沒有報道。
　　 本文以從土壤中篩選產脂肪酶微生物與實驗室現有商品脂肪酶為基礎,建立了脂肪酶平臺,供不對稱水解DL-蘇式-對甲砜基苯絲氨酸乙酯進行酶源選擇。利用改進型初篩培養(yǎng)基及傳統復篩培養(yǎng)基,共從65份土壤樣品中高效地篩選出

2、了19株產脂肪酶微生物,其中酶活相對較高的菌株有9株。
　　 研究過程中發(fā)現對甲砜基苯絲氨酸乙酯能夠在純水中自發(fā)水解及在有機溶劑脂肪酶水解的過程中發(fā)生一系列副反應,通過正相、反相HPLC、LC-MS、1H NMR等分析檢測方法,共檢測出了10種副產物,同時也考察了一些因素,如pH、溫度、底物濃度等對于副反應的影響;通過觀察研究,推理出了合理的副反應機制。研究發(fā)現,對甲砜基苯甲醛在整個副反應中作為一個關鍵的中間副產物存在:以一定速

3、率水解的對甲砜基苯絲氨酸乙酯能夠作為副反應的驅動力,從而促進副反應的進行;在純水中,加入一些金屬離子能夠有效地抑制p-MPSE自發(fā)副反應的發(fā)生。
　　 通過研究,確立了對甲砜基苯絲氨酸乙酯酶促不對稱水解最適微水有機溶劑為叔丁醇,最適脂肪酶酶源為Novozyme 435;通過考察各類因素對酶促不對稱水解對甲砜基苯絲氨酸乙酯的影響,確定了最佳的催化拆分條件;對于能夠發(fā)揮抑制副反應效用的Zn2+的考察顯示,Zn2+的加入將加快底物的轉