基于激發(fā)態(tài)分子內(nèi)質(zhì)子轉(zhuǎn)移探針的單核苷酸多態(tài)性生物傳感研究.pdf

1、單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。SNP是引起常見疾病的突變類型之一，是人類可遺傳變異最常見的一種，SNP的研究已經(jīng)成為基因組時代的一個熱點。本論文基于DNA堿基缺失位點（AP位點）設計的熒光增強型SNP檢測方法具有快速，靈敏，背景低的優(yōu)點。在此基礎上，我們運用含有脫堿基位點的DNA作為適配體實現(xiàn)了對天然黃酮類化合物簡單

2、，快速的檢測。主要研究內(nèi)容如下:
　　1.基于有機小分子探針—漆黃素的熒光增強型單核苷酸多態(tài)性識別研究
　　選擇可以在脫堿基位點（AP位點）發(fā)生激發(fā)態(tài)分子內(nèi)質(zhì)子轉(zhuǎn)移(ESIPT)的3-羥基黃酮類—漆黃素作為探針，建立了簡單快速的熒光增強型SNP識別方法。在靶標堿基對應的探針鏈上引入AP位點有利于漆黃素ESIPT過程的發(fā)生，而ESIPT發(fā)生的效率則取決于AP位點對面的靶標堿基。通過漆黃素對AP位點的選擇性結(jié)合來實現(xiàn)SNP識別。

3、實驗結(jié)果表明:當AP位點對面的靶標堿基為胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)時表現(xiàn)出最強的熒光發(fā)射，而當靶標堿基為鳥嘌呤(G)和腺嘌呤(A)時的熒光發(fā)射要低得多。這種SNP識別方法可以高選擇性的區(qū)分嘧啶和嘌呤，而且這種對堿基的區(qū)分不受AP位點側(cè)翼堿基的影響。此方法的創(chuàng)新點在于實現(xiàn)了無標記的熒光增強型SNP識別。
　　2.基于核酸脫堿基位點的適配體在天然黃酮類檢測方面的研究
　　采用含有脫堿基位點的DNA作為適配體，這種適配體對漆黃素

4、表現(xiàn)出高度的選擇性和靈敏度，而對其他種黃酮類物質(zhì)（桑色素，蘆丁，芹菜素，山奈酚，楊梅素，槲皮素，木犀草素，黃芩素，柚皮素，染料木素，白楊素以及高良姜素）均未表現(xiàn)出此特性。通過這種選擇特異性結(jié)合可以對漆黃素進行快速的檢測。實驗結(jié)果表明:當信噪比為3時，該檢出限可達50nM，我們此方法中所用的適配體不需要任何熒光基團的修飾，因此，熒光背景是完全可以忽略不計的。
　　3.基于楊梅素對AP位點的靶向識別來實現(xiàn)對AP位點的檢測
　　采

5、用3-羥基黃酮類中的另一種物質(zhì)—楊梅素作為探針，通過熒光穩(wěn)態(tài)，熒光瞬態(tài)，熒光共振能量轉(zhuǎn)移以及DNA熔點的測定等表征方法研究了楊梅素與AP位點的結(jié)合特性。實驗結(jié)果表明:在水溶液環(huán)境中，楊梅素幾乎不發(fā)熒光，而在加入AP-DNA后，熒光發(fā)射會有明顯的增強，此熒光發(fā)射的增強是由于3位羥基和4位羰基之間發(fā)生激發(fā)態(tài)分子內(nèi)質(zhì)子轉(zhuǎn)移過程產(chǎn)生了互變異構(gòu)體。最重要的是，與前面的漆黃素相比，它的熒光增強并不依賴于AP位點的側(cè)翼堿基。因此，楊梅素與AP位點這種