茯磚茶中“金花菌”的生物學(xué)特性及其產(chǎn)消化酶活性的研究.pdf

1、最早的茯磚茶是明朝初年陜西茶商以陜南茶為原料筑制的一種緊壓茶,在其磚身內(nèi)外生長(zhǎng)繁殖一種金黃色的真菌,人們將此真菌俗稱“金花菌”。判斷茯磚茶品質(zhì)的好壞,人們通常根據(jù)“金花菌”的質(zhì)量和數(shù)量來(lái)進(jìn)行,以此作為茯磚茶品質(zhì)的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。由于“金花菌”功能強(qiáng)大近幾年來(lái)受到人們的關(guān)注。本研究以陜西茯磚茶中提取的“金花菌”為菌種,進(jìn)行了“金花菌”的生物學(xué)特性分析。通過(guò)優(yōu)化試驗(yàn),確定“金華菌”的最適固體及液體培養(yǎng)條件。在最適培養(yǎng)條件下,測(cè)定其產(chǎn)酸性蛋白酶、堿

2、性蛋白酶、中性蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的酶活。通過(guò)實(shí)驗(yàn)分析可知:金花菌有明顯的產(chǎn)中性和堿性蛋白酶酶活。進(jìn)而對(duì)其產(chǎn)中性和堿性蛋白酶的培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 a、從陜西茯磚茶中分離純化得到一株“金花菌”,將其分別接種到馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基、改良察氏培養(yǎng)基(含5%NaCl)、察氏瓊脂培養(yǎng)基、改良察氏培養(yǎng)基(含14%NaCl)、20%蔗糖察氏瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行菌落、菌體及其繁殖特征的觀察,并通過(guò)ITS序列在分子水平上對(duì)菌株

3、進(jìn)行鑒定。得出結(jié)論為:從陜西茯磚茶中分離出來(lái)的“金花菌”的鑒定結(jié)果為冠突散囊菌。
　　 b、以菌絲球干重為指標(biāo)在基礎(chǔ)液體發(fā)酵培養(yǎng)基上對(duì)冠突散囊菌的液體發(fā)酵培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化。①考察不同碳源:蔗糖、硝酸胺、尿素、蛋白胨、酵母浸粉、大豆粉;碳源的不同含量:0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%;不同氮源:蔗糖、玉米粉、葡萄糖、乳糖、可溶性淀粉;氮源的不同含量:2%、4%、6%、8%、10%對(duì)冠突散囊菌液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化。②考察接種量

4、1%、5%、10%,在250mL三角瓶中的裝液量12%、16%、20%,轉(zhuǎn)速110r/min、140r/min、150r/min,pH值5.0、5.5、6.0,對(duì)冠突散囊菌液體發(fā)酵的影響。最終確定最佳液體培養(yǎng)條件為:氮源為2.5%大豆粉、碳源為6%蔗糖、接種量10%、250mL三角瓶中的裝瓶量16%、搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min、起始pH5.0。在此條件下培養(yǎng),冠突散囊菌的菌絲球干重可達(dá)到0.32%。
　　 選取三種較佳的液體培養(yǎng)條

5、件進(jìn)行消化酶酶活的測(cè)定:條件A:接種量5%、裝瓶量16%、搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min、起始pH5.0。條件B:接種量10%、裝瓶量16%、搖瓶轉(zhuǎn)速110r/min、起始pH5.5。條件C:接種量lO%、裝瓶量16%、搖瓶轉(zhuǎn)速150r/min、起始pH5.0。測(cè)定結(jié)果三種條件下冠突散囊菌均不產(chǎn)酸性蛋白酶和脂肪酶,產(chǎn)中性蛋白酶的酶活分別為5U/mL、4U/mL、8U/mL,產(chǎn)堿性蛋白酶的酶活分別為4U/mL、2U/mL、6U/mL,產(chǎn)淀粉酶的

6、酶活分別為3U/mL、5U/mL、7U/mL。
　　 c、以孢子數(shù)為指標(biāo)對(duì)冠突散囊菌的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,在10g麩皮上分別添加4mL,7mL、10mL、13mL、16mL水考察產(chǎn)孢子數(shù)的影響;考察不同的培養(yǎng)溫度24℃、28℃、32℃、37℃對(duì)產(chǎn)孢量的影響,最后確定較佳的培養(yǎng)條件為:添水量為10mL,培養(yǎng)溫度28℃,在此條件下冠突散囊菌的產(chǎn)孢量可達(dá)到8.0×108個(gè)/g。
　　 研究冠突散囊菌在基礎(chǔ)固體培養(yǎng)基上產(chǎn)蛋白酶、淀

7、粉酶、脂肪酶的活性,研究結(jié)果表面:冠突散囊菌培養(yǎng)到第5天產(chǎn)淀粉酶的酶活可達(dá)到254.3U/g,培養(yǎng)到第6天產(chǎn)脂肪酶的酶活可達(dá)到11.4U/g,培養(yǎng)到第7天產(chǎn)中性蛋白酶的酶活為160.2U/g,產(chǎn)堿性蛋白酶的酶活為117.SU/g培養(yǎng),培養(yǎng)到第4.5天產(chǎn)酸性蛋白酶為22.6U/g。研究結(jié)果表明該菌以產(chǎn)中性與堿性蛋白酶為主,且在培養(yǎng)的第7d酶活均達(dá)到最大。添加不同碳源蔗糖、乳糖、麥芽糖、可溶性淀粉、玉米粉;不同氮源硝酸胺、尿素、蛋白胨、酵母

8、粉、大豆粉;無(wú)機(jī)鹽MgSO4·7H2O、MHSO4·H2O、ZnSO4·7H2O、CaCl2、FeSO4·7H2O對(duì)冠突散囊菌產(chǎn)中性和堿性蛋白酶的培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化,研究結(jié)果表明:最適碳源為乳糖、最適氮源為麩皮、最適無(wú)機(jī)鹽為氯化鈉。在此最適培養(yǎng)基下產(chǎn)中性蛋白酶的酶活力可達(dá)到237.0U/g,產(chǎn)堿性蛋白酶的酶活力可達(dá)到235.8U/g。
　　 d、將冠突散囊菌液體發(fā)酵液進(jìn)行大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌實(shí)驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果證明冠突散囊茵發(fā)酵