一種新型抗菌多肽的制備及其藥理、藥效和毒性研究.pdf

1、目的：
　　 在畢赤酵母GSll5中表達抗菌肽ABPj-1，檢測其抗菌、抗病毒活性。觀察ABPj-1對實驗動物神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的影響；觀察ABPj-1對實驗動物的急性毒性、長期毒性和致畸作用。為臨床用藥提供實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 人工合成ABPj-1的基因序列并克隆至畢赤酵母表達載體pPIC9K。重組表達質粒pPIC9K-ABPj-1轉化至畢赤酵母 GS115中，經(jīng)G418篩選，誘導陽性克隆

2、菌株表達，鑒定產(chǎn)物并進行熱．穩(wěn)定性試驗，攻毒試GS驗。檢測其抗G菌41抗病毒活性。經(jīng)口服給藥觀察其對小鼠的自主活動的影響，以了解其對實驗動物神經(jīng)系統(tǒng)影響；觀察ABPj-1對麻醉犬血壓、心率、呼吸頻率和呼吸幅度等一系列指標，了解其對心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的影響。應用急性毒性試驗、長期毒性試驗、全身過敏試驗、致突變試驗和微核試驗研究其毒性作用。
　　 結果：
　　 成功建立了重組質粒pPIC9K-ABP-j1，并在畢赤酵母GS

3、115中成功誘導表達，并經(jīng)SDS-PAGE鑒定到目的蛋白。經(jīng)檢測，ABP-j1具有較強的熱穩(wěn)定性，并具有較強的抗菌、抗病毒活性。
　　 本實驗中，單次經(jīng)口灌服ABP-j1分別為2.5mg/kg、10mg/kg、40mg/kg后，小鼠自主活動正常，沒有表現(xiàn)興奮或抑制狀態(tài)，而且與戊巴比妥鈉鎮(zhèn)靜催眠無明顯協(xié)同作用。給麻醉犬靜脈分別注射2.5mg/kg、10mg/kg、40mg/kg后，對實驗動物的心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)沒有明顯影響。