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1、隨著工業(yè)社會(huì)的繁榮發(fā)展,人類日益暴露在雌激素環(huán)境中,雌激素直接或間接地對(duì)人類與動(dòng)物造成不同程度的危害,甚至導(dǎo)致癌變死亡。2000年,國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)以“環(huán)境類激素影響人類健康的機(jī)理”為重點(diǎn)項(xiàng)目予以招標(biāo),在我國(guó)正式啟動(dòng)了對(duì)環(huán)境激素類物質(zhì)的大規(guī)模研究。而到目前為止,有關(guān)雌激素的檢測(cè)手段還比較單一,多渠道、多角度、快速、靈敏的檢測(cè)手段有待進(jìn)一步開(kāi)發(fā)與加強(qiáng),以便實(shí)現(xiàn)對(duì)雌激素的長(zhǎng)效監(jiān)控。
本論文從以下幾個(gè)方面展開(kāi)研究工作:
2、 一、本研究利用高效液相(HPLC)色譜法來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)雌二醇、雌三醇、炔雌醇、雌素酮、乙烯雌酚的精確靈敏檢測(cè)。在優(yōu)化色譜條件下,建立以上5種雌激素的標(biāo)準(zhǔn)曲線,且R2≥0.9992。并利用該方法對(duì)同一組樣品進(jìn)行5次平行實(shí)驗(yàn),確定其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.5%以內(nèi)。且分別以鴨、鵝、魚(yú)進(jìn)行不同濃度的加標(biāo)實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明不同加標(biāo)濃度,其加標(biāo)回收率均在87.1%~103.5%之間。并且本實(shí)驗(yàn)對(duì)來(lái)自浙江、江蘇5個(gè)不同地區(qū)的鴨、鵝、魚(yú)15個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè)分析
3、。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該方法靈明度高,回收率好,重現(xiàn)性強(qiáng),且樣品制備較簡(jiǎn)單,因此適用于水禽及水產(chǎn)品中雌激素的檢測(cè)。
二、基于薄層石墨烯優(yōu)異的導(dǎo)電性及生物兼容性及表面吸附性,構(gòu)建了基于薄層石墨烯的酪氨酸酶生物傳感器。本研究首先利用化學(xué)還原法制備了薄層石墨烯,并利用透射電鏡(TEM),選區(qū)電子衍射(SAED)對(duì)其進(jìn)行表征。然后將薄層石墨烯、殼聚糖、酪氨酸酶按一定比例混合,制備石墨烯-酪氨酸酶-殼聚糖電極(GR-Tyr-CS/GCE)
4、。在優(yōu)化pH及溫度等檢測(cè)條件后,電流-時(shí)間法(I-T)測(cè)得雙酚A(BPA)的濃度線性范圍為7.5×10-8~2.5×10-6mol L-1,相關(guān)系數(shù)R2=0.997,檢測(cè)限為:2.18×10-8mol L-1(信噪比S/N=3)。這項(xiàng)工作將為BPA殘留提供靈敏、快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法。
三、基于石墨烯-金復(fù)合物的生物兼容性、表面吸附性及優(yōu)異的電子傳輸性,以及酪氨酸酶對(duì) BPA的催化氧化還原作用,構(gòu)建了基于石墨烯/金的酪氨酸酶生物
5、傳感器。利用透鏡(TEM)、拉曼(Rama)、能譜(EDS)等技術(shù)表征石墨烯/金復(fù)合材料,并制備石墨烯/金-酪氨酸酶-殼聚糖電極(GR/Au-Tyr-CS/GCE)。在一定濃度的BPA溶液中進(jìn)行循環(huán)伏安掃描,優(yōu)化底液 pH及溫度等檢測(cè)條件,利用差分脈沖伏安法(DPV)測(cè)得 BPA的濃度線性范圍為2.5×10-8~3×10-6 mol L-1,線性回歸方程為Ip=3.156C+11.437,相關(guān)系數(shù)R2=0.998,檢測(cè)出現(xiàn)為1.64×1
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