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文檔簡介
1、全球因肝癌致死率僅次于肺癌和胃癌,居惡性腫瘤致死率的第3位[1]。此外,肝癌的隱匿性起病、高惡性程度、高死亡率等特點,導(dǎo)致絕大多數(shù)患者確診時已處于中晚期,失去了手術(shù)治療最佳時機。即使將腫瘤切除或進行化學(xué)療法,都無法獲得有效的治療效果。因此,探索新的治療途徑顯得尤為重要。腫瘤靶向治療因能夠特異、高效殺傷腫瘤細(xì)胞,是目前治療腫瘤的希望之星。目前靶向結(jié)合技術(shù)主要是將基因、抗體或多肽等與載體相連,通過表面攜帶的特異性媒介,使其能靶向的到達目的組
2、織或器官,并與相應(yīng)的抗原或受體結(jié)合,其中,以納米顆粒作為載體的腫瘤靶向治療已成為研究熱點[2-4]。
近年來,國內(nèi)外許多研究[5-6]表明,GPC3作為細(xì)胞表面糖蛋白,在正常肝組織和肝炎患者中不表達而在HCC中特異性高表達。由于GPC3單抗對肝癌的免疫治療正在進行不同的臨床階段[7-10],充分說明其對細(xì)胞表面的GPC3蛋白具有較好的親和力和特異性結(jié)合作用,故可用GPC3單抗介導(dǎo)抗腫瘤藥物以設(shè)計靶向性的抗腫瘤系統(tǒng)。因此,本論文
3、正是利用載體偶聯(lián)和抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng),將與納米顆粒偶聯(lián)的GPC3抗體作用于肝癌細(xì)胞系HepG2和正常肝細(xì)胞L02,與HepG2表面的GPC3蛋白結(jié)合,實現(xiàn)了抗體與肝癌細(xì)胞的靶向結(jié)合,為進一步靶向研究提供支持。
目的:研究證明GPC3在肝癌細(xì)胞和正常肝細(xì)胞中的表達差異,并研究GPC3在肝癌細(xì)胞中的分布特征,為靶向治療機制研究奠定理論基礎(chǔ)和實驗技術(shù)支持。
方法:采用EDC作為中間連接體,利用交聯(lián)劑碳二亞胺(EDC)可在
4、范德華力用作距離之內(nèi)的-COOH與-NH2之間形成交聯(lián)鍵的特點,誘導(dǎo)載藥二氧化硅納米粒與GPC3單克隆抗體偶聯(lián),制備GPC3 antibody-SiO2免疫交聯(lián)物。采用圓二色譜儀對其表征。HepG2細(xì)胞和LO2細(xì)胞分別與培養(yǎng)液、SiO2、GPC3 antibody、GPC3 antibody-SiO2,培養(yǎng)一定時間后,利用免疫熒光法檢測GPC3在不同細(xì)胞中的分布情況。
結(jié)果:制備GPC3 antibody-SiO2復(fù)合物,利用
5、圓二色譜儀表征,其抗體變化微弱,進一步證實了GPC3單克隆抗體交聯(lián)到二氧化硅納米粒上。SiO2、GPC3antibody、GPC3 antibody-SiO2,空白對照組分別與HepG2細(xì)和LO2細(xì)胞培養(yǎng),免疫熒光實驗證明在HepG2細(xì)胞中加有GPC3抗體和GPC3 antibody-SiO2組呈陽性,而L02細(xì)胞四組均呈陰性,僅細(xì)胞核染上DAPi。
結(jié)論:GPC3 antibody-SiO2復(fù)合物制備成功;免疫熒光檢測表明G
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