牛乳酪蛋白活性肽構(gòu)效關(guān)系研究及定向酶解初探.pdf

1、本論文主要研究了酪蛋白來(lái)源的ACE抑制肽和酪蛋白磷酸肽的構(gòu)效關(guān)系及初步探索了構(gòu)效關(guān)系指導(dǎo)下酪蛋白的定向酶解。為了研究磷酸肽分子結(jié)構(gòu)和持鈣功能之間的關(guān)系，首先在酪蛋白磷酸肽核心結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)合成了6條不同結(jié)構(gòu)的磷酸肽，測(cè)定了其阻止磷酸鈣沉淀的能力，模擬腸道環(huán)境下磷酸肽所持鈣透過(guò)半透膜的能力以及磷酸肽的表觀結(jié)合常數(shù)，并將合成的磷酸肽與純化的商品磷酸肽進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，磷酸基的數(shù)量和位置均是磷酸肽的持鈣能力的重要影響因素，在所有的合成磷

2、酸肽中，含兩個(gè)不連續(xù)的磷酸絲氨?；牧姿犭某肘}效果最好且透過(guò)半透膜的能力最強(qiáng)。
　　 繼而用藥效團(tuán)模型研究了ACE抑制肽的構(gòu)效關(guān)系，首先搜集了文獻(xiàn)報(bào)道的28條ACE抑制肽及其活性作為訓(xùn)練集生成藥效團(tuán)模型，得到的最優(yōu)模型含有五個(gè)特征：一個(gè)陰離子中心(N)，兩個(gè)氫鍵受體(A1 and A2)，兩個(gè)疏水中心(H1 andH2)，接著用該模型在肽庫(kù)預(yù)測(cè)和篩選得到三條新的具有較高ACE抑制活性的肽序列并委托合成該肽。對(duì)合成肽進(jìn)行了活性檢測(cè)

3、，結(jié)果表明活性肽的半抑制濃度排序和預(yù)測(cè)結(jié)果一致。
　　 最后選擇39種蛋白酶，用酶切軟件peptidecutter對(duì)已知序列的酪蛋白進(jìn)行模擬酶切，根據(jù)生成的寡肽數(shù)量篩選最適水解用酶并進(jìn)行了酶解驗(yàn)證，確定了胰蛋白酶為最適用酶，在40℃，pH為7.5的酶解條件下，酪蛋白轉(zhuǎn)化利用率達(dá)到90.32％。再通過(guò)超濾分離酶解液得到了分子量小于1k部分，其ACE抑制率從分離前的15.19％提高到了92.31％(測(cè)定濃度均為2.36 mg/ml)