抗體藥物偶聯(lián)物的制備研究.pdf

1、抗體藥物偶聯(lián)物抗體藥物偶聯(lián)物的制備研究制備研究Preparationofantibodydrugconjugates學(xué)科專業(yè)：化學(xué)工藝研究生：梁延桂指導(dǎo)教師：蘇延磊副教授天津大學(xué)化工學(xué)院二零一三年六月摘要近年來，抗體藥物偶聯(lián)物(ADC)引起了抗腫瘤抗體藥物研究領(lǐng)域?qū)＜业膹V泛關(guān)注。ADC主要包括抗體、接頭(linker)以及藥物3部分。有多種方法用于制備抗體藥物偶聯(lián)物。抗體上有限的幾個鏈間二硫鍵為抗體與藥物的連接提供了很好的位點(diǎn)。采用二硫

2、鍵進(jìn)行藥物連接的偶聯(lián)物可以由兩個步驟來完成：抗體鏈間二硫鍵的還原；與帶有接頭的藥物的偶聯(lián)。本論文采用分子排阻色譜和聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）兩種方法來檢測抗體還原后產(chǎn)物，通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用SDSPAGE的方法可以將抗體以及抗體還原后的產(chǎn)物很好的分離，可以作為優(yōu)化抗體還原反應(yīng)條件的一種檢測方法。同時本文對兩種還原劑還原抗體的動力學(xué)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)抗體重鏈與輕鏈間的二硫鍵比抗體重鏈與重鏈間的二硫鍵更容易還原。反應(yīng)溫度、反應(yīng)pH、還

3、原劑與抗體的摩爾比是影響還原劑還原抗體的反應(yīng)的三個因素，采用響應(yīng)面法進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出，還原劑與抗體摩爾比對HCLC的產(chǎn)率影響最為顯著，其次為反應(yīng)溫度，最后為反應(yīng)pH。通過不斷改變抗體與還原劑比例，從九種具有不同反應(yīng)參數(shù)的還原劑來進(jìn)行篩選試驗(yàn)，研究數(shù)據(jù)表明巰基乙醇（DTT）、巰基乙胺、乙酰半胱氨酸（AcCys）和三(2甲酰乙基)膦鹽酸鹽（TCEP）在一定的比例還原IgG時顯示出一定的選擇性，當(dāng)DTTIgG=2，巰基乙胺IgG=

4、50，TCEPIgG=0.5和AcCysIgG=3時，相應(yīng)的HCLC比例分別是30.4%、26.5%、25.8%和29.5%。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到最優(yōu)反應(yīng)溫度為37℃，最優(yōu)反應(yīng)pH為7~8之間。將還原后的抗體與帶有馬來酰亞胺接頭的藥物反應(yīng)，進(jìn)行抗體藥物偶聯(lián)物制備實(shí)驗(yàn)。偶聯(lián)反應(yīng)在優(yōu)化的還原反應(yīng)參數(shù)下進(jìn)行，并且采用疏水層析和反相液相色譜分析對產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，確定了每個抗體上平均偶聯(lián)上了接近四個藥物的最優(yōu)反應(yīng)條件。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：抗體藥物偶聯(lián)物二硫鍵