微生物轉(zhuǎn)化香蘭素的初步研究.pdf

1、本文對(duì)Streptomyces L1936轉(zhuǎn)化香蘭素的最佳培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件以及發(fā)酵液中香蘭素、阿魏酸及其它副產(chǎn)物的檢測(cè)方法等進(jìn)行了初步研究,并對(duì)阿魏酸制備進(jìn)行了探索性實(shí)驗(yàn).確定了HPLC法檢測(cè)發(fā)酵液中阿魏酸、香蘭素及其它副產(chǎn)物的條件.采用薄層層析定性檢測(cè)香蘭素、阿魏酸,并建立了簡(jiǎn)便易行的分光光度法檢測(cè)發(fā)酵液中的香蘭素.運(yùn)用正交設(shè)計(jì)理論確定了酶預(yù)處理黑麥麩皮的最佳條件:耐高溫.-淀粉酶量為40μ/g干燥黑麥麩皮,1398蛋白酶為36μ/g

2、干燥黑麥麩皮,糖化酶為400μ/g干燥黑麥麩皮,緩沖液用量為300mL.堿水解提取阿魏酸最佳條件為:氫氧化鈉濃度為1.0﹪,提取溫度為60℃,提取時(shí)間為6h.加入保護(hù)劑后,阿魏酸的提取量可達(dá)3.114mg/g黑麥麩皮.將提取物溶液進(jìn)行減壓濃縮后進(jìn)行香蘭素的轉(zhuǎn)化試驗(yàn),香蘭素產(chǎn)量達(dá)到0.174g/L.對(duì)菌株Streptomyces L1936的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化:通過(guò)單因素試驗(yàn),研究了不同碳、氮源種類(lèi)、無(wú)機(jī)鹽對(duì)香蘭素產(chǎn)量的影響.在單因素試

3、驗(yàn)的基礎(chǔ)上,利用響應(yīng)面分析法優(yōu)化了培養(yǎng)基中影響香蘭素轉(zhuǎn)化的主要因素,通過(guò)分析求得葡萄糖(X<,1>)、酵母膏(X<,2>)、MgSO<,4>·7H<,2>O(X<,3>)的最佳濃度分別為1.0g/L、1.0g/L、0.2g/L.最終確定Streptomyces L1936的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基為:葡萄糖1.0g,酵母膏1.0g,MgSO<,4>·7H<,2>O 0.2g,Na<,2>HPO<,4> 4g,KH<,2>PO<,4> 1g,NaC

4、l 0.2g,CaCl<,2>·2H<,2>O 0.05g,水1000mL,初始pH值為7.4.對(duì)菌株Streptomyces L1936的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,確定了最佳接種量為6﹪;最佳發(fā)酵溫度為37℃;500mL的擋板三角瓶最佳裝液量為50mL;搖床轉(zhuǎn)數(shù)為190r/min.對(duì)底物阿魏酸的添加方式進(jìn)行了研究,阿魏酸在菌體生長(zhǎng)至穩(wěn)定期添加效果較好.在搖瓶條件下,確定阿魏酸的初始添加濃度以不超過(guò)6g/L為宜.采用分批補(bǔ)料轉(zhuǎn)化法可解除阿魏酸