木質(zhì)纖維素微生物降解酶系的探究與優(yōu)化.pdf

1、為了提高來自里氏木霉的纖維素酶降解木質(zhì)纖維素的效率，我們在里氏木霉和畢赤酵母中使用異源表達技術表達并構建了復合型酶系。來自Clostridiumstercorarium的耐熱纖維素內(nèi)切酶Cel9a和經(jīng)過熱穩(wěn)定性改造的里氏木霉胞內(nèi)β-葡萄糖苷酶Cel1b-S在里氏木霉中分別使用XYNⅡ和CBHⅠ的啟動子和信號肽序列進行了表達分泌。Cel1b-S同樣在畢赤酵母GS115中得到了異源表達，經(jīng)鎳柱純化后與里氏木霉纖維素酶混合，并以微晶纖維素和脫

2、木素玉米芯等木質(zhì)纖維素作為底物進行了糖化水解測試，對其纖維素降解能力進行了高效液相色譜(HPLC)測定。
　　為了更深層次的理解絲狀真菌降解木質(zhì)纖維素的機理，我們嘗試對里氏木霉的胞外纖維素酶多聚體進行了純化。我們使用凝膠過濾色譜(GFC)、疏水作用色譜(HIC)及離子交換色譜(IEC)對分離濃縮后的里氏木霉T1胞外蛋白進行純化，并對經(jīng)過純化后的蛋白樣品進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(BN PAGE)進行檢測。我們將在接下來的工作中嘗