nHAP-PLA中空多孔微球的制備及成骨細(xì)胞的響應(yīng).pdf

1、骨組織工程技術(shù)是目前公認(rèn)的最有希望修復(fù)骨缺陷的治療方法之一。生物反應(yīng)器是獲取大量骨組織種子的重要途徑。微球具有較大的比表面積，短時(shí)間細(xì)胞可以在微球表面大量增殖。并且培養(yǎng)過程中添加微載體就可以完成細(xì)胞的傳代，避免了傳統(tǒng)培養(yǎng)方法中使用胰酶消化對(duì)細(xì)胞的損害。但是目前商業(yè)化的微載體降解能力差，價(jià)格昂貴。因此，研制優(yōu)質(zhì)微載體生物材料仍是當(dāng)前研究熱點(diǎn)。本研究通過使用致孔劑聯(lián)合乳化揮發(fā)法制備出聚乳酸(Polylactide，PLA)和納米羥基磷灰石/

2、聚乳酸(Nano-Hydroxyap atiten/Polylactide，nHAP/PLA)中空多孔微球，考察不同的微球的物化性質(zhì)，并將成骨細(xì)胞(Osteoblasts，OBs)接種在微球上，考察微球的生物相容性，以期制備出最適合成骨細(xì)胞生長的微球。
　　以二氯甲烷(CH2Cl2)為溶劑，明膠為分散劑，NH4HCO3為致孔劑制備中空多孔的PLA微球。微球的粒徑大小和粒徑分布受聚乳酸濃度、分散劑濃度、復(fù)乳攪拌速度和致孔劑濃度等因素

3、影響。采用相同工藝制備了nHAP/PLA微球，通過比較不同nHAP加入量微球的表面形貌、吸水率、接觸角和懸浮能力，篩選出最適合細(xì)胞培養(yǎng)的nHAP/PLA微球，并通過正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化制備工藝。將培養(yǎng)至第4代SD大鼠的成骨細(xì)胞接種到微球上，考察不同nHAP含量的nHAP/PLA微球上細(xì)胞的黏附，增殖和蛋白表達(dá)的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在一定的范圍內(nèi)，聚乳酸微球粒徑隨著聚乳酸濃度的增大而增大，分散劑濃度的增大而降低，復(fù)乳攪拌速度的增大而減

4、小;微球平均粒徑隨nHAP含量的增大先減小后增大。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:當(dāng)nHAP含量為20％時(shí)，復(fù)合微球制備的最佳水平組合為PLA濃度為10％、明膠濃度為0.25％、轉(zhuǎn)速為300 rpm和NH4HCO3濃度為10％。nHAP含量為20％時(shí)nHAP/PLA中空多孔微球具有最大的蛋白吸附能力，親水性和細(xì)胞黏附能力。培養(yǎng)5天，nHAP含量為20％的nHAP/PLA微球上細(xì)胞數(shù)量最多與細(xì)胞分布狀況最為均勻;培養(yǎng)至14天和21天，成骨細(xì)胞ALP和總