蒼術(shù)總萜醇的制備工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、目的：
　　通過對不同產(chǎn)地的蒼術(shù)藥材及飲片的質(zhì)量進(jìn)行比較研究，確定出本課題的藥材產(chǎn)地，進(jìn)而達(dá)到以下目的：（1）對蒼術(shù)藥材活性部位的篩選；（2）對蒼術(shù)活性部位的生產(chǎn)制備工藝進(jìn)行優(yōu)化；（3）對蒼術(shù)活性部位的化學(xué)成分的分析；（4）對蒼術(shù)總萜醇的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究并對其穩(wěn)定性進(jìn)行考察。
　　方法：
　　蒼術(shù)藥材及其飲片的質(zhì)量比較研究：依據(jù)藥典標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)文獻(xiàn)，從性狀、鑒別、總灰分檢查、水分和含量測定等項(xiàng)對不同產(chǎn)地蒼術(shù)藥材及飲片進(jìn)行

2、質(zhì)量比較研究，以確定本課題最佳藥材產(chǎn)地。
　　蒼術(shù)活性部位的選擇：通過對茅蒼術(shù)藥材分別采用不同方法進(jìn)行分離純化得到三種不同部位樣品，針對以上樣品進(jìn)行藥效學(xué)試驗(yàn)篩選，確定出活性部位是以水蒸氣蒸餾法制得的蒼術(shù)總萜醇提取物。
　　蒼術(shù)活性部位的生產(chǎn)工藝優(yōu)化：以水蒸氣蒸餾法作為提取方法，根據(jù)生產(chǎn)成本、生產(chǎn)條件以及藥材提取方法的特點(diǎn)等因素，選擇加水量、浸泡時(shí)間、提取時(shí)間和藥材粒徑四個(gè)因素，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法對藥材的生產(chǎn)工藝進(jìn)行優(yōu)化，以

3、總萜醇產(chǎn)率作為評價(jià)指標(biāo)，確定出蒼術(shù)活性部位的最佳提取工藝條件。
　　蒼術(shù)活性部位的化學(xué)成分研究：采用GC-MS法對蒼術(shù)活性部位的化學(xué)成分進(jìn)行研究。色譜條件：以 BPX5（25m×0.22mm×0.25μm）為分析柱，采用程序升溫，起始溫度為60℃，保持該溫度3min，以10℃/min的速度升溫至150℃，再以3℃/min的速度升溫至220℃，然后以25℃/min的速度升溫至250℃，保持此溫度2min，載氣流速為1ml/min，分

4、流比為15:1。質(zhì)譜條件：EI源，電子能量70eV，離子源溫度200℃，接口溫度230℃，檢測器電壓400V，質(zhì)量范圍10-550amu，Xcalibur化學(xué)工作站NIST標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫檢索。
　　蒼術(shù)總萜醇質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究及穩(wěn)定性考察：蒼術(shù)總萜醇的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究項(xiàng)目包括性狀、鑒別（理化鑒別和GC鑒別）、檢查（水分、熾灼殘?jiān)?、重金屬和砷鹽）和含量測定等。含量測定以茅術(shù)醇與β-桉葉醇為指標(biāo)成分，以正十五醇為內(nèi)標(biāo)物，采用氣相色譜法對其進(jìn)行質(zhì)

5、量控制，并進(jìn)行了方法學(xué)考查。在2005年版《中國藥典（一部）》和2010年版《中國藥典（一部）》基礎(chǔ)上，建立了色譜定量方法。根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究及2005年版《中國藥典（一部）》、2010年版《中國藥典（一部）》等相關(guān)法規(guī)文件指導(dǎo)，進(jìn)行了蒼術(shù)總萜醇的穩(wěn)定性考察，包括影響因素試驗(yàn)（光照、高溫、高濕）、加速試驗(yàn)（40℃±2℃、相對濕度75％±5%）及室溫留樣考察試驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　蒼術(shù)藥材及其飲片的質(zhì)量比較研究試驗(yàn)表明：不同產(chǎn)

6、地蒼術(shù)藥材茅術(shù)醇和β-桉葉醇含量差異很大，其中茅術(shù)醇與β-桉葉醇含量總和最高值為6.029%，最低值為0.032%，茅術(shù)醇單一成分含量在0.007～3.673%之間，β-桉葉醇單一成分含量在0.022～2.356%之間。比較不同產(chǎn)地藥材，湖北與陜西產(chǎn)的蒼術(shù)中茅術(shù)醇與β-桉葉醇含量較高，總灰分較低，且湖北英山縣蒼術(shù)（購自湖北英山縣宏業(yè)中藥材種植合作社）資源豐富，產(chǎn)量大，供貨穩(wěn)定。為了保障原藥材質(zhì)量的穩(wěn)定性，供應(yīng)的持續(xù)性，綜合考慮，選用湖北

7、藥材作為蒼術(shù)總萜醇提取的原藥材，以保證藥材品種來源的正確性和質(zhì)量的可靠性。
　　蒼術(shù)活性部位的篩選：以水蒸氣蒸餾法制得的蒼術(shù)總萜醇提取物經(jīng)動(dòng)物藥效學(xué)試驗(yàn)證實(shí)具有減少大鼠胃液量，降低胃液中游離酸、總酸度及5小時(shí)總酸排量的作用，因此選用水蒸氣蒸餾法作為蒼術(shù)藥材提取的方法?；钚圆课患礊橐悦┥n術(shù)為原料藥材，經(jīng)水蒸氣蒸餾法制得的蒼術(shù)總萜醇提取物。
　　蒼術(shù)活性部位的生產(chǎn)工藝研究表明：根據(jù)生產(chǎn)成本、生產(chǎn)條件以及藥材提取方法的特點(diǎn)等因素，

8、選擇加水量(A)、浸泡時(shí)間(B)、提取時(shí)間(C)和藥材粒徑(D)四個(gè)因素，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法對藥材的生產(chǎn)工藝進(jìn)行優(yōu)化，以總萜醇產(chǎn)率作為評價(jià)指標(biāo)，確定蒼術(shù)總萜醇最佳提取工藝條件為A3B2C2D3，即蒼術(shù)藥材顆粒（過6目篩），適量，加8倍量的水，浸泡3小時(shí)，水蒸氣蒸餾提取8小時(shí)。根據(jù)方差分析，藥材的提取時(shí)間對總萜醇產(chǎn)率有極顯著影響，加水量有顯著性影響，浸泡時(shí)間和藥材粒徑?jīng)]有顯著性影響，且各水平的極差很小，考慮到生產(chǎn)成本及時(shí)間周期，因此將最佳

9、工藝調(diào)整為A3B3C2D3，即，蒼術(shù)藥材顆粒（過6目篩），適量，加8倍量的水，水蒸氣蒸餾提取8小時(shí)。
　　蒼術(shù)活性部位的化學(xué)成分分析表明：從蒼術(shù)活性部位中鑒定出20個(gè)組分，其中相對含量>1%的組分為欖香醇、茅術(shù)醇、β-桉葉醇、γ-桉葉醇、α-桉葉醇和2,3-Dihydro-1-oxo- phenalene，其中茅術(shù)醇和β-桉葉醇兩組分的相對含量之和為87%。蒼術(shù)總萜醇中除了主要含有倍半萜醇類成分，還含有倍半萜烯類成分，該類成分相對

10、含量為1.79%。
　　蒼術(shù)總萜醇質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的結(jié)果顯示：蒼術(shù)總萜醇為淡黃色至棕褐色油性固體，氣香特異，味辛、苦。易溶于乙酸乙酯、正已烷。鑒別各項(xiàng)均呈正反應(yīng)，檢查項(xiàng)水分、熾灼殘?jiān)?、重金屬、砷鹽等含量均較低。對于含量測定，以茅術(shù)醇與β-桉葉醇為指標(biāo)成分，用GC法對蒼術(shù)總萜醇進(jìn)行含量測定，并進(jìn)行了方法學(xué)考查。結(jié)果表明，此法是準(zhǔn)確、方便、易行的，其精密度、重復(fù)性、加樣回收率等均符合2010年版《中國藥典（一部）》附錄XVIII A中藥質(zhì)

11、量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則的規(guī)定。
　　蒼術(shù)總萜醇的穩(wěn)定性考察內(nèi)容包括：影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和室溫留樣考察試驗(yàn)。影響因素試驗(yàn)結(jié)果表明，蒼術(shù)總萜醇在光照、高濕、高溫條件下，含量無明顯變化，即說明蒼術(shù)總萜醇在光照、高濕和高溫條件比較穩(wěn)定。加速試驗(yàn)結(jié)果表明蒼術(shù)總萜醇在40℃±2℃、相對濕度75%±5%的條件下放置六個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定。長期試驗(yàn)結(jié)果表明，蒼術(shù)總萜醇于室溫放置18個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定。
　　結(jié)論：
　

12、?、俅_定了蒼術(shù)藥材的活性部位，并進(jìn)行了蒼術(shù)活性部位的生產(chǎn)工藝的優(yōu)化試驗(yàn)研究，確定出最佳提取工藝。②對蒼術(shù)活性部位的化學(xué)成分進(jìn)行GC-MS分析，鑒定出其中20個(gè)組分，以面積歸一法測得各組分相對含量,已鑒定出的化合物占總萜醇總組分的99%以上。③對蒼術(shù)總萜醇的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，并制訂出蒼術(shù)總萜醇的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案。首次建立了五類新藥蒼術(shù)總萜醇中茅術(shù)醇和β-桉葉醇的氣相色譜條件，并對該測定方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。方法學(xué)考察結(jié)果表明，該法線性關(guān)系良好