維生素D受體與特發(fā)性低枸櫞酸尿癥之間關(guān)系的研究.pdf

1、目的：（1）探討維生素D受體（VDR）基因FokI、TaqI、BsmI和ApaI位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與特發(fā)性低枸櫞酸尿癥的關(guān)系及其臨床意義。（2）合成并篩選有效SiRNA干擾維生素D受體（VDR）基因使其表達(dá)下調(diào)，為進(jìn)一步研究VDR與特發(fā)性低枸櫞酸尿癥之間的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。（3）探討維生素D受體（VDR）基因與二羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NaDC1表達(dá)調(diào)控之間的關(guān)系，以利于弄清特發(fā)性低枸櫞酸尿癥的發(fā)病機(jī)制。
　　 方法：（1）實(shí)驗(yàn)篩選出無(wú)特發(fā)性低

2、枸櫞酸尿癥者50名及特發(fā)性低枸櫞酸尿癥患者31名，通過(guò)PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)VDR基因FokI、TaqI、BsmI和、ApaI位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性，并分析其與特發(fā)性低枸櫞酸尿癥之間的相關(guān)性。（2）依據(jù)GeneBank中提供的VDR基因序列設(shè)計(jì)并化學(xué)合成三對(duì)SiRNA，利用Lipofectamine? 2000分別轉(zhuǎn)染至三組人腎近曲小管上皮細(xì)胞，并通過(guò)RT-PCR和Western-Blot技術(shù)分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后三組細(xì)胞VDR基因的表達(dá)變化，

3、確定有效SiRNA。（3）依據(jù)GeneBank中VDR基因序列設(shè)計(jì)合成SiRNA轉(zhuǎn)染人腎近曲小管上皮細(xì)胞，通過(guò)Real-Time PCR和Westeren-Blot技術(shù)檢測(cè)干擾前后，二羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NaDC1的表達(dá)的情況。
　　 結(jié)果：（1）特發(fā)性低枸櫞酸尿癥患者組與正常組之間，VDR基因ApaI位點(diǎn)各基因型頻率未見(jiàn)明顯差異（P>0.05）；而VDR基因FokI、TaqI和BsmI位點(diǎn)各基因型頻率存在顯著性差異（P<0.05），在

4、特發(fā)性低枸櫞酸尿癥患者組中ff、TT及bb型較為多見(jiàn)。并且，在兩組人群中，基因型為ff (1.91±1.03mmol/24h)型、TT(1.90±0.96mmol/24h)型和bb(1.97±0.90mmol/24h)型者24小時(shí)尿枸櫞酸含量明顯低于同組的FF(2.67±1.02 mmol/24h)、Ff(2.55±0.95 mmol/24h)、Tt(2.58±0.98mmol/24h)、tt(2.72±1.05mmol/24h)及BB

5、(3.41±0.52 mmol/24 h)和Bb (2.67±1.05 mmol/24 h)基因型（P<0.05）。（2）利用Lipofectamine 2000將三對(duì)SiRNA分別轉(zhuǎn)染至三組人腎近曲小管上皮細(xì)胞后，我們發(fā)現(xiàn)三組細(xì)胞中的VDR基因表達(dá)水平較轉(zhuǎn)染前皆有所下調(diào)，并且其中一組細(xì)胞中VDR基因的表達(dá)水平在轉(zhuǎn)染后下調(diào)最為明顯，最具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.05。而其它兩組細(xì)胞中的VDR基因表達(dá)水平不如此組改變顯著。（3）轉(zhuǎn)染有效SiRN

6、A至人腎近曲小管上皮細(xì)胞干擾其VDR基因表達(dá)后，二羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NaDC1的表達(dá)水平相比轉(zhuǎn)染前明顯下調(diào)。干擾前后NaDC1的表達(dá)水平存在顯著差異，P<0.05。
　　 結(jié)論：（1）這些結(jié)果顯示特發(fā)性低枸櫞酸尿癥與VDR-FokI、VDR-TaqI及VDR-BsmI單核苷酸多態(tài)性間存在遺傳相關(guān)性，而與VDR-ApaI單核苷酸多態(tài)性關(guān)聯(lián)不明顯。VDR基因FokI位點(diǎn)的ff型基因、TaqI位點(diǎn)的TT型基因及BsmI位點(diǎn)的bb型基因有望成