二斑葉螨對(duì)阿維菌素抗藥性機(jī)理的研究.pdf

1、本文為明確二斑葉螨對(duì)阿維菌素的抗藥性機(jī)理，于2005年9月至2007年5月進(jìn)行了以下幾方面的研究： 1．根據(jù)害蟲(chóng)抗藥性形成的自然選擇學(xué)說(shuō)和基因突變學(xué)說(shuō)，首先在本實(shí)驗(yàn)室已有抗性種群的基礎(chǔ)上，繼續(xù)以殺死種群60％的劑量進(jìn)行逐代汰選，由原來(lái)的20代汰選到35代，并采用FAO推薦的玻片浸漬法，測(cè)定2.0％阿維菌素乳油對(duì)二斑葉螨抗性品系和敏感品系的毒力，建立回歸方程以求得抗性指數(shù)，結(jié)果表明，抗性指數(shù)由原來(lái)的8.09增加到13.76，已形成

2、明顯的抗性品系。再分別測(cè)定敏感品系和已獲得的抗性品系體內(nèi)的羧酸酯酶、乙酰膽堿酯酶、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶的比活力。結(jié)果顯示：敏感品系羧酸酯酶的比活力為0.3759 μmol．mg<'-1>Pr.min<'-1>，抗性品系羧酸酯酶的比活力為0.4908μmol．mg<'-1>Pr.min<'-1>，是敏感品系的1.3057倍，兩者之間差異不明顯；敏感品系乙酰膽堿酯酶的比活力為0.1798 μmol．mg<'-1>Pr.min<'-1>，抗性

3、品系乙酰膽堿酯酶的比活力為0.5478 μmol．mg<'-1>Pr.min<'-1>，是敏感品系的3.0475倍，兩者之間差異顯著：敏感品系谷胱甘肽．S．轉(zhuǎn)移酶的比活力為0.0052OD．mg<'-1>Pr.min<'-1>，抗性品系的比活力為0.01880D.．mg<'-1>Pr.min<'-1>，為敏感品系的3.6233倍，兩者之間存在顯著差異。 結(jié)果表明羧酸酯酶活性的變化與二斑葉螨對(duì)阿維菌素產(chǎn)生抗藥性的關(guān)系不大，而乙酰膽

4、堿酯酶、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶活力的增強(qiáng)可能是二斑葉螨對(duì)阿維菌素產(chǎn)生抗性的主要原因。 2．進(jìn)一步研究二斑葉螨抗性品系酯酶同功酶的變化情況。二斑葉螨抗性品系與敏感品系的酯酶同功酶電泳圖譜均顯示至少有4條明顯的譜帶，這4條帶顯色深淺不一，并且可分為兩種類型的顏色，E<,1>-E<,2>帶為紫褐色系列，E<,1>顏色較深，染色較強(qiáng)，E<,3>-E<,4>帶為淺灰褐色，E<,3>顏色較深，染色較強(qiáng)。抗性品系與敏感品系相比，所有的抗性品系酶

5、帶染色均比敏感品系的強(qiáng)。表明二斑葉螨經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的阿維菌素汰選，酯酶活性已增強(qiáng)。由測(cè)得的酯酶譜帶遷移率可以看出抗性品系與敏感品系各酶帶的遷移率基本相同，沒(méi)有明顯的變化。譜帶的遷移距離與相應(yīng)酶的分子質(zhì)量成正相關(guān)，即抗性品系與敏感品系相比酶的分子結(jié)構(gòu)沒(méi)有發(fā)生明顯的變化，可能是分子構(gòu)型或構(gòu)象發(fā)生了變化。 3．在室內(nèi)25℃條件下通過(guò)構(gòu)建實(shí)驗(yàn)種群生命表，比較二斑葉螨抗性品系(R)和敏感品系(S)的一系列生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖特征。結(jié)果表明：在發(fā)育歷期

6、、卵孵化率、幼蟲(chóng)存活率、有效產(chǎn)卵量等體現(xiàn)二斑葉螨在生長(zhǎng)發(fā)育與繁殖能力的諸多指標(biāo)上，其抗性品系(R)與敏感品系(S)相比均存在一定的不利性，抗性品系的相對(duì)適合度僅為敏感品系的0.53，存在適合度缺陷。 4．對(duì)抗藥性二斑葉螨進(jìn)行了分子標(biāo)記初探。采用了隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA(RandomAmplified Polymorphic DNA，簡(jiǎn)稱RAPD)的方法，篩選出可以用于區(qū)分二斑葉螨抗性種群和敏感種群的引物序列。結(jié)果表明所選用的20種隨