發(fā)酵法制備大豆抑菌液的過(guò)程優(yōu)化及分離鑒定.pdf

1、近年來(lái)，隨著微生物對(duì)抗生素的抗藥性產(chǎn)生，人們對(duì)于尋找新型抗菌方法的研究日趨關(guān)注。本課題以大豆分離蛋白為原料，通過(guò)微生物發(fā)酵法制備含有抑菌活性多肽的發(fā)酵液。首先進(jìn)行發(fā)酵菌種的篩選，其次研究發(fā)酵培養(yǎng)基成分添加量、發(fā)酵過(guò)程參數(shù)對(duì)發(fā)酵液抑菌性的影響，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)發(fā)酵過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化。并對(duì)發(fā)酵液中抑菌成分進(jìn)行提取純化研究。
　　首先對(duì)發(fā)酵菌種進(jìn)行篩選，用黑曲霉、枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌和納豆芽孢桿菌四種發(fā)酵常用菌進(jìn)行發(fā)酵，比較其抑菌活性大小篩

2、選出產(chǎn)抑菌物質(zhì)的最佳菌種，結(jié)果表明黑曲霉發(fā)酵液無(wú)抑菌性，納豆芽孢桿菌發(fā)酵液對(duì)指示菌的抑菌性最大，因此選取納豆芽孢桿菌作為實(shí)驗(yàn)發(fā)酵菌種;選取常見(jiàn)霉菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌、酵母菌作為指示菌，驗(yàn)證了納豆芽孢桿菌發(fā)酵液的廣譜抑菌性。
　　通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)研究不同培養(yǎng)基成分添加量和發(fā)酵條件對(duì)發(fā)酵液抑菌性及多肽含量的影響。結(jié)果表明，發(fā)酵培養(yǎng)基成分為大豆蛋白添加量6％、葡萄糖0.4％、NaCl0.05％時(shí)抑菌性最佳，發(fā)酵時(shí)間56h、裝液量

3、100mL、發(fā)酵溫度37℃、接種量12％、pH7.0為最佳發(fā)酵條件，發(fā)酵液多肽含量變化趨勢(shì)與其基本相符。
　　利用鹽析法即硫酸銨沉淀法對(duì)發(fā)酵液中的抑菌成分進(jìn)行分離，確定最佳硫酸銨飽和度為70％;研究溫度、pH、蛋白酶對(duì)抑菌提取液的影響，為發(fā)酵液貯藏條件及穩(wěn)定性提供依據(jù)，結(jié)果表明溫度在60℃以下抑菌性較為穩(wěn)定，pH對(duì)提取液抑菌性影響較小，胰蛋白酶處理后提取液抑菌性明顯降低;利用傅里葉紅外光譜分析原料大豆蛋白發(fā)酵前后的結(jié)構(gòu)變化可以看出