克百威農(nóng)藥殘留檢測(cè)用無標(biāo)記電流型免疫傳感器的制備方法研究.pdf

1、本論文對(duì)免疫傳感器的研究進(jìn)展進(jìn)行了簡(jiǎn)要綜述，運(yùn)用自組裝、溶膠-凝膠、電沉積、共價(jià)鍵合等技術(shù)構(gòu)建了檢測(cè)克百威農(nóng)藥殘留的電化學(xué)免疫傳感器，并引入納米金、多壁碳、殼聚糖、蛋白A等新型納米材料和電介質(zhì)材料以提高免疫傳感器的檢測(cè)性能。
　　本論文主要從以下幾方面開展研究工作：
　　(1)基于L-半胱氨酸/納米金無標(biāo)記電流型免疫傳感器對(duì)克百威的檢測(cè)
　　利用納米金膠(GNPs)和L-半胱氨酸（L-cysteine)將克百威單克隆抗

2、體固定在金電極表面，使用辣根過氧化物酶（HRP)來封閉免疫傳感器上的非特異性位點(diǎn)，同時(shí)H R P對(duì)底物的催化作用可以增大電流響應(yīng)。L-cysteine通過Au-S穩(wěn)定地固定在金電極表面并同時(shí)將GNPs吸附在電極表面。通過L-cysteine結(jié)合的納米金膠可以提供電子轉(zhuǎn)移通道，以提高免疫傳感器的電流響應(yīng)，同時(shí)提供了大量固定GNPs和HRP的結(jié)合位點(diǎn)。對(duì)其測(cè)試條件進(jìn)行優(yōu)化，在最優(yōu)條件下，電流響應(yīng)與克百威的濃度在0.01ng/mL到50 ng

3、/m L內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)為0.9912，檢測(cè)限為0.01 ng/mL(S/N=3)。
　　(2)溶膠—凝膠無標(biāo)記克百威農(nóng)藥免疫傳感器的制備
　　克百威單克隆抗體(Ab)通過硅溶膠凝膠(SiSG)包埋技術(shù)固定在玻碳電極(GCE)表面。通過一步固定的方法制備了靈敏的、無標(biāo)記的、電流型的Ab/SiSG/GCE免疫傳感器。因?yàn)楣潭ǖ碾姸栊詮?fù)合物阻止了[Fe(CN)6]3-/4-向電極表面擴(kuò)散，因此隨著克百威濃度的增大

4、，CV的電流值有了明顯的降低。對(duì)其測(cè)試條件進(jìn)行優(yōu)化，在最優(yōu)條件下，克百威農(nóng)藥的濃度和電流響應(yīng)在1 ng/mL到100μg/mL和50μg/mL到200μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其檢測(cè)限為0.33 ng/mL(S/N=3)。
　　(3)基于納米金和三維復(fù)合膜的免疫傳感器修飾方法的研究
　　通過納米金(DpAu)，普魯士藍(lán)-多壁碳納米管-殼聚糖(PB-MWCNTs-CTS)納米復(fù)合膜和蛋白A(SPA)材料的層層組裝技術(shù)

5、制備了用于克百威農(nóng)藥檢測(cè)的電流型免疫傳感器。DpAu,PB和MWCNTs復(fù)合物用來增強(qiáng)免疫傳感器的電化學(xué)特性和穩(wěn)定性。同時(shí)制作的復(fù)合膜提供了大量連接蛋白A的氨基和羧基，為蛋白A提供了較大的表面區(qū)域。蛋白A的固定為大量的定向固定抗體提供了媒介。對(duì)其測(cè)試條件進(jìn)行優(yōu)化，在最優(yōu)條件下其較寬的線性范圍為0.1 ng/mL和1 pg/mL,檢測(cè)限為0.021 ng/mL(S/N=3)。
　　(4)用于克百威農(nóng)藥檢測(cè)的網(wǎng)狀混合膜的制備
　

6、　通過層層自組裝技術(shù)把克百威單克隆抗體(Ab)固定在金電極的表面。組裝的免疫傳感器是基于電沉積納米金(DpAu)，4,4'-二巰基對(duì)苯硫酚-3-巰基丙酸-納米金膠(DMDPSE-MPA-GNPs)網(wǎng)狀納米膜和蛋白A的基礎(chǔ)上建立起來的。DpAu用于增強(qiáng)傳感器的電化學(xué)特性和穩(wěn)定性。制作的網(wǎng)狀混合膜可以提供大量羧基去連接大量的蛋白A，進(jìn)而定向、大量的固定抗體，并盡可能大的保持了抗體的生物活性。免疫傳感器的電流特性通過循環(huán)伏安(CV)和交流阻抗