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文檔簡介
1、磁靶向載藥體系在腫瘤治療領(lǐng)域擁有廣闊的應(yīng)用前景,其使用價(jià)值取決于是否具備優(yōu)秀的超順磁性、良好的生物相容性以及有效的藥物活性等。所以,在近些年來制備功能不同的磁靶向載藥體系已經(jīng)成為了新的研究熱點(diǎn)。希望能實(shí)現(xiàn)其優(yōu)秀的磁響應(yīng)性,且給予其較好的生物相容性,藥物活性以及靶向示蹤等性質(zhì)。本論文在這一研究背景之下,從制備超順磁性納米磁核開始,將實(shí)驗(yàn)工作分為三個(gè)階段。第一階段(第二章、第三章)的目標(biāo)是探索出一種新的磁靶向微球制備方法,并對其進(jìn)行表征;第
2、二階段(第四章、第五章)的目標(biāo)是在繼承上一階段成果的基礎(chǔ)上,分別探索對磁靶向微球進(jìn)行熒光化修飾和藥物負(fù)載的方法,然后分別進(jìn)行表征;第三階段(第六章)的目標(biāo)是在繼承前兩階段經(jīng)驗(yàn)成果的基礎(chǔ)上,同時(shí)對磁靶向微球進(jìn)行熒光化修飾與藥物負(fù)載,得到了熒光標(biāo)記磁靶向載藥微球,并對所制備的微球進(jìn)行表征。具體研究結(jié)果如以下幾個(gè)方面所示:
(1)第一階段:
使用水熱共沉淀和油相熱分解這兩種方法,分別制備出了兩種四氧化三鐵(Fe3O
3、4)納米顆粒,并對其進(jìn)行了相應(yīng)的材料表征,測試了兩種納米材料的磁性能、熱重分析、顆粒形貌等,并研究比較了兩種四氧化三鐵納米顆粒的異同,然后選擇水熱共沉淀法作為后續(xù)制備磁性納米材料的制備方法。
采用超聲乳液反應(yīng)法制備了納米磁性蛋白微球。著重探討不同反應(yīng)條件對于制備過程的影響,并通過大量實(shí)驗(yàn)得出最優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)制備條件。另外還對于超聲乳液反應(yīng)法的反應(yīng)原理進(jìn)行了探討。研究了超聲空化效應(yīng)在乳液體系中的作用,闡述了牛血清蛋白分子結(jié)合成微
4、球殼層的機(jī)理。
(2)第二階段:
利用超聲乳液反應(yīng)法制備了熒光標(biāo)記磁性納米微球。先后使用了兩種方法探討在制備過程中引入熒光功能基團(tuán)的途徑。第一種方法是在超聲反應(yīng)聚合前,對牛血清蛋白進(jìn)行熒光修飾。第二種方法是在超聲反應(yīng)聚合后,利用微球殼層中牛血清蛋白的-NH2作為反應(yīng)位點(diǎn),對已成型的納米微球進(jìn)行表面熒光修飾。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,在超聲聚合前進(jìn)行熒光修飾,有可能會影響到蛋白質(zhì)殼層的形成。而在超聲聚合后對微球表面進(jìn)行熒光
5、修飾則可以避免這一情況的出現(xiàn)。通過對其進(jìn)行材料表征發(fā)現(xiàn),微球在磁響應(yīng)性與結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性等方面均沒有受到熒光修飾過程的影響。而對其進(jìn)行熒光光譜分析后發(fā)現(xiàn),微球的熒光強(qiáng)度與樣品的濃度呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)性。
將超聲乳液反應(yīng)法與超細(xì)化粉碎技術(shù)相結(jié)合,制備出了磁性四環(huán)素載藥微球。使用超細(xì)化技術(shù)將四環(huán)素粉末的平均粒徑降至1μm左右,改善了四環(huán)素藥物顆粒在乳液反應(yīng)體系中的大小以及分布情況,使其能更好的溶解分散在微乳液滴中,從而得到磁性四環(huán)素載
6、藥微球。通過進(jìn)行透射電鏡、振動樣品磁強(qiáng)計(jì)和細(xì)菌抑制實(shí)驗(yàn)等測試,可以發(fā)現(xiàn)微球自身的結(jié)構(gòu)并沒有因?yàn)榘菜幬锒黄茐?。在抑菌?shí)驗(yàn)中,磁性四環(huán)素載藥微球展現(xiàn)了十分明顯的藥物活性。這些說明由超聲乳液反應(yīng)法所制備的磁性納米微球可以用于負(fù)載治療藥物,并在磁場的引導(dǎo)下,使其進(jìn)行靶向運(yùn)輸。
(3)第三階段:
結(jié)合制備熒光標(biāo)記磁性納米微球與磁性四環(huán)素載藥微球的經(jīng)驗(yàn),制備出熒光標(biāo)記磁性抗癌載藥微球。為了使超聲乳液反應(yīng)方法具有更廣泛
7、的藥物適用性,選用了親水性較強(qiáng)的氟尿嘧啶作為包覆對象。使用濕式球磨法,加入了硬脂酸作為改性劑。最后制得了粒徑合適而且具有一定疏水性的氟尿嘧啶復(fù)合微納米粒子。當(dāng)藥物負(fù)載完成后,使用異硫氰酸羅丹明B對載藥微球進(jìn)行表面熒光修飾,從而得到熒光標(biāo)記磁性抗癌載藥微球。通過振動樣品磁強(qiáng)計(jì)與熒光光譜分析發(fā)現(xiàn),熒光標(biāo)記磁性抗癌載藥微球依然具有良好的超順磁性和熒光發(fā)光性,利用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT法)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn),熒光標(biāo)記磁性抗癌載藥微球?qū)τ谛?/p>
8、鼠癌細(xì)胞有明顯的殺傷作用。
綜上所述,本論文從制備磁性四氧化三鐵納米磁核開始,利用超聲乳液反應(yīng)的方法,結(jié)合超細(xì)化粉碎改性技術(shù),先后制備完成了納米磁性蛋白微球、熒光標(biāo)記磁性納米微球、磁性四環(huán)素載藥微球、熒光標(biāo)記磁性抗癌載藥微球。探索了在制備納米磁靶向載藥體系的一系列問題與解決方案,制備出飽和磁化強(qiáng)度35emu/g以上,微球粒徑300nm以下,具有能與熒光等功能基團(tuán)反應(yīng)的活性位點(diǎn),并擁有藥物活性的納米磁靶向載藥體系。這為納米磁
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