鄰苯二甲酸二丁酯的酶聯(lián)免疫吸附分析研究.pdf

1、圓碩士學(xué)位論文巡必尸MAS飛‘工R‘S’‘’工’S’S碩士學(xué)位論文令卜苯二甲酸二丁酉旨的酶聯(lián)免疫吸附分析研究論文作者:魏晨曦指導(dǎo)教師:袁均林副教授學(xué)科專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向:生物化學(xué)華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院2011年5月③碩士學(xué)位論文MAS，J’ER一511于ESIS摘要鄰苯二甲酸二丁醋(DBP)屬于鄰苯二甲酸酷類化合物的一員。主要用作硝基纖維素漆的增塑劑，也可作為聚氯乙烯和聚醋酸乙烯等塑料的增塑劑。同時(shí)是防沫劑、乳膠粘合劑

2、以及紡織纖維潤(rùn)滑劑的工業(yè)原料，還可用作染料和殺蟲劑的溶劑。這些材料廣泛用于制造我們的日常生活用品，例如:塑料制品、油漆、膠水、驅(qū)蟲劑、香水、發(fā)膠、指甲油等。DBP可在其生產(chǎn)或摻入到塑料、粘合劑和染料的過程中釋放到環(huán)境。另外由于DBP不與終產(chǎn)品共價(jià)結(jié)合，隨著使用時(shí)間的推移，可不斷地釋出進(jìn)入到環(huán)境。環(huán)境中的DBP可通過呼吸、飲食以及皮膚接觸等多種途徑進(jìn)入人體。近年來，DBP被認(rèn)為是一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，具有生殖毒性、發(fā)育毒性以及潛在的致癌性

3、等。為了更好測(cè)定DBP在環(huán)境中的污染水平以及評(píng)價(jià)暴露于環(huán)境中的DBP產(chǎn)生的潛在不利影響，必須建立一種快速、簡(jiǎn)便、靈敏、費(fèi)用低廉的方法檢測(cè)DBP在環(huán)境和生活用品中的殘留量。目前國內(nèi)外對(duì)DBP的監(jiān)測(cè)方法主要有氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用(GC一MS)和高效液相色譜法(HPLc)等技術(shù)，但這些分析方法對(duì)儀器條件要求高，前處理的操作過程相對(duì)復(fù)雜、耗時(shí)。免疫分析特別是酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)由于不需要昂貴的儀器設(shè)備，且特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便快捷

4、，在現(xiàn)場(chǎng)篩選和大量樣本的快速檢測(cè)中顯示了其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。本研究以4一硝基鄰苯二甲酸和正丁醇為原料，經(jīng)過酷化、還原合成了具有DBP結(jié)構(gòu)特征的半抗原4一氨基鄰苯二甲酸二丁酷(DBAP)。用重氮化法將DBAP與卵清蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)得到人工抗原DBAP一OVA和DBAP一BSA。用DBAP一OVA免疫BALBc小鼠獲得了高效價(jià)、高靈敏度的抗血清。利用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備并篩選出了1株能穩(wěn)定分泌抗DBP抗體的雜交瘤細(xì)胞株

5、DBP一4E9，其染色體數(shù)目為96一105條，分泌抗體的亞型為IgGI。小鼠腹水法大量制備的DBP單抗經(jīng)辛酸一硫酸錢沉淀法純化，純度為91.1%，回收率為68.3%。基于此單抗的ELISA最適檢測(cè)條件是:以1%OVA作封閉劑競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)體系為含10%nMF、l，6%Nael、0.1%BsA的0.01molLpH6.8磷酸鹽緩沖液25oC競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)1.5h。建立的人工抗原包被間接競(jìng)爭(zhēng)ELIsA在包被抗原DBAP一BsA濃度為0.25林gmL，單