CYP3A4介導(dǎo)的葉菌唑與氟苯嘧啶醇立體選擇性代謝研究.pdf

1、三唑類和嘧啶醇類殺菌劑作為兩種廣泛使用的手性殺菌劑，目前已在多種環(huán)境介質(zhì)中檢測(cè)到殘留超標(biāo)，生態(tài)安全事故頻發(fā)。然而關(guān)于人CYP3A4酶介導(dǎo)的三唑類和嘧啶醇類殺菌劑立體選擇性代謝研究匱乏，分子作用機(jī)制亦不明確。本文選取葉菌唑、氯/氟苯嘧啶醇為目標(biāo)化合物，分離制備了對(duì)映體，進(jìn)行了關(guān)于CYP3A4酶介導(dǎo)代謝的立體選擇性研究，從與CYP3A4酶相互作用角度，詮釋了這兩類殺菌劑的代謝立體選擇差異性的分子機(jī)制。主要獲取的結(jié)果和結(jié)論如下：
　　(

2、1)采用高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）成功分離和制備了葉菌唑四個(gè)單一手性異構(gòu)體，并利用圓二色光譜儀(CircularDichroism，CD)和含時(shí)密度泛函理論(Time-dependent Density Functional Theory,TDDFT)鑒定了各對(duì)映體的絕對(duì)化學(xué)構(gòu)型。
　　(2)選取葉菌唑cis-RS和cis-SR兩種單體，研究了人肝微粒體

3、(Human LiverMicrosome，HLM)和CYP3A4酶介導(dǎo)的代謝的立體選擇性差異，發(fā)現(xiàn)葉菌唑能被HLM和CYP3A4酶降解，其中，CYP3A4酶為葉菌唑的主要代謝酶，其對(duì)葉菌唑的降解率遵循cis-RS＞ cis-SR。代謝過(guò)程中，對(duì)映體分?jǐn)?shù)(Enantiomer Fraction, EF)由0.5逐漸增大到0.82，表明cis-RS能優(yōu)先被CYP3A4酶代謝，存在顯著的對(duì)映體選擇性差異。
　　(3)針對(duì)氯/氟苯嘧啶醇

4、進(jìn)行了人CYP3A4酶介導(dǎo)的體外代謝研究，發(fā)現(xiàn)氯苯嘧啶醇和氟苯嘧啶醇均能被CYP3A4酶代謝。氟苯嘧啶醇代謝速率大于氯苯嘧啶醇。氯苯嘧啶醇降解率與時(shí)間不成規(guī)律性變化，代謝無(wú)明顯對(duì)映體差異;氟苯嘧啶醇代謝具有一定立體選擇性差異，R型-氟苯嘧啶醇能優(yōu)先被CYP3A4酶降解，并且代謝具有顯著時(shí)間依賴性。
　　(4)采用CYP3A4 Glo熒光素酶檢測(cè)技術(shù)分析了葉菌唑單體對(duì)人CYP3A4酶的活性影響。通過(guò)熒光光譜技術(shù)在分子水平上研究了葉菌

5、唑?qū)τ丑w單體與人CYP3A4酶結(jié)合后誘導(dǎo)的CYP3A4酶的構(gòu)象變化，比較了不同單體結(jié)合力強(qiáng)弱。從相互作用角度分析了CYP3A4酶介導(dǎo)的葉菌唑的立體選擇性代謝差異。葉菌唑是CYP3A4酶的強(qiáng)抑制劑，抑制效果具有濃度依賴性并遵循cis-SR＞cis-RS。葉菌唑?qū)τ丑wcis-RS和cis-SR與CYP3A4酶結(jié)合模式各異，對(duì)CYP3A4蛋白結(jié)構(gòu)微環(huán)境產(chǎn)生的影響不同，可能引起蛋白功能破壞程度的差異。
　　(5)從分子間相互作用角度分析了

6、氯/氟苯嘧啶醇與CYP3A4酶的作用機(jī)制。酶活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)氯/氟苯嘧啶醇是CYP3A4酶的抑制劑，抑制效果遵循S-氟苯嘧啶醇＞R-氯苯嘧啶醇＞S-氯苯嘧啶醇＞R-氟苯嘧啶醇。熒光光譜法結(jié)合分子對(duì)接證實(shí)了氯/氟苯嘧啶醇會(huì)導(dǎo)致CYP3A4酶微觀結(jié)構(gòu)的改變。氯/氟苯嘧啶醇對(duì)映體與CYP3A4酶的相互作用力主要為氫鍵和范德華力，但作用強(qiáng)度有所差異，順序分別為R-氯苯嘧啶醇＞S-氯苯嘧啶醇和S-氟苯嘧啶醇＞R-氟苯嘧啶醇。
　　(6)通過(guò)酵母