酸性蛋白酶高產(chǎn)菌株的誘變育種及工藝優(yōu)化.pdf

1、酸性蛋白酶是一種能在低pH下水解蛋白質(zhì)為多肽和氨基酸的一類酶，其最適作用pH值為2.5～5.0。由于酸性蛋白酶具有較好的耐酸性，因此被廣泛地應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、輕工、皮革工藝以及飼料加工工業(yè)中。我國也在1956年以來陸續(xù)選育了一批優(yōu)良產(chǎn)酸菌株，并已工業(yè)化生產(chǎn)。但長期以來，酸性蛋白酶的應(yīng)用不廣，產(chǎn)量不高，嚴(yán)重妨礙了我國酸性蛋白酶的應(yīng)用推廣，因此本研究以選育更高產(chǎn)酸水平的優(yōu)良菌株為目標(biāo)，進(jìn)行了以下幾方面的研究，并得到以下結(jié)論:
　　(1

2、)論文以宇佐美曲霉537為研究對象，利用紫外線射線、60Co-γ射線和等離子體對出發(fā)菌株進(jìn)行誘變篩選試驗，并比較了三種誘變方式對菌株的致死率及正負(fù)突變率的影響，并分別得到三種誘變方式的最佳誘變劑量為40 min、0.5 KGy和60×2.6×1013 ions/cm2。結(jié)果表明，在分別選擇了三種誘變方式的最佳誘變劑量下，三種誘變方式均得到了較好的誘變效果，等離子體誘變效果最佳，60Co-γ射線誘變效果次之。為了能夠得到產(chǎn)酸性蛋白酶更好產(chǎn)

3、量的優(yōu)良菌株，論文最后以60Co-γ射線和等離子體復(fù)合誘變的方式篩選出最佳菌株CI07，產(chǎn)酶活力為1.333×104 U/mL，原始菌株M-537酶活力為4.15×103 U/mL，CI07菌株酶活力較原始菌株酶活力提高了221.2％，對CI07突變菌株進(jìn)行傳代穩(wěn)定性實驗發(fā)現(xiàn)，其產(chǎn)酶活力穩(wěn)定性良好。
　　(2)在發(fā)酵實驗中，尋找適合菌株生長代謝的營養(yǎng)源以及發(fā)酵方式是一條可行的途徑，對于發(fā)酵培養(yǎng)基組分的優(yōu)化實驗是提高產(chǎn)量必不可少的一

4、個環(huán)節(jié)，通過培養(yǎng)基優(yōu)化實驗往往會使產(chǎn)量達(dá)到大幅度的提高。為了得到酸性蛋白酶的更大產(chǎn)量，本論文以確定最佳培養(yǎng)基成分和比例為初衷，對培養(yǎng)基優(yōu)化進(jìn)行了單因素影響實驗和響應(yīng)面分析試驗，最終確定對突變菌株產(chǎn)酸性蛋白酶影響較大的因素為碳源（玉米粉）、氮源（豆餅粉）和磷酸鹽(KH2PO4)，并確定這三種成分最適值豆餅粉濃度為51g/L，玉米粉濃度為10.0 g/L，KH2PO4濃度為3.1 g/L。
　　(3)通過考察不同初始pH、溫度、裝液量