多壁碳納米管及其所含鐵對PC12細胞的影響.pdf

1、實驗目的：探討多壁碳納米管及其所含鐵對PC12細胞分化前后形態(tài)的影響。
　　實驗方法：
　　運用ICP-MS檢測多壁碳納米管內(nèi)Fe++的精確含量；實驗設計對照組、Low-Fe++MWCNTs組、High-Fe++MWCNTs組，運用CCK-8試劑盒檢測不同濃度（5、10、30、60μg/ml）多碳納米管孵育不同時間（24、48、72h）的細胞活力變化；通過dead/live染色觀察碳納米管孵育細胞48h的細胞狀態(tài)，并應用免疫

2、熒光檢測F-actin的構象變化。為觀察多壁碳納米管對細胞分化的影響，將多壁碳納米管與細孵育48h，再用50ng/mlNGF連續(xù)誘導細胞分化7天，對每個細胞的軸突數(shù)量和細胞分化率進行計數(shù)；應用免疫熒光技術檢測細胞特異性骨架蛋白β-tubulin的構象及分布變化，并檢測TH的表達。為初步探討多碳納米管對PC12細胞形態(tài)的影響機制，將多壁碳納米管與細胞孵育48h，再運用TEM觀察多壁碳納米管在細胞內(nèi)的定位以及亞細胞結構的變化；運用激光共聚焦

3、顯微鏡檢測細胞內(nèi)ROS的生成。
　　實驗結果：
　　ICP-MS檢測發(fā)現(xiàn)High-Fe++MWCNTs含鐵量為12％，Low-Fe++MWCNTs含鐵量為4.2%；CCK-8法檢測顯示不同濃度多壁碳納米管（5、10、30、60μg/ml）孵育細胞24h或48h時細胞活力無變化，當多壁碳納米管與細胞孵育72h，High-Fe++MWCNTs在濃度大于10μg/ml時對細胞有毒性作用，Low-Fe++MWCNT在濃度大于30μg

4、/ml時對細胞有毒性作用；免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)30μg/ml的High-Fe++MWCNTs孵育細胞2天時導致F-actin在細胞邊緣表達減弱或凝結成結節(jié)樣，Low-Fe++MWCNT致F-actin張力減弱。
　　將多壁碳納米管與細孵育48h，再用50ng/mlNGF連續(xù)誘導細胞分化7天，發(fā)現(xiàn)30μg/ml High-Fe++ MWCNTs和Low-Fe++MWCNTs對細胞軸突數(shù)量及分化率無影響，但是都能抑制TH的表達；High-

5、Fe++MWCNTs抑制β-tubulinⅢ的表達并致使F-actin和β-tubulinⅢ在突起內(nèi)的重合減弱。
　　在初步探討碳納米管與細胞作用機制時發(fā)現(xiàn)，High-Fe++ MWCNTs和Low-Fe++MWCNTs都能進入細胞并以折疊或成團狀存在于大小空泡內(nèi)，High-Fe++MWCNTs組細胞傾向凋亡，細胞內(nèi)ROS生成不明顯。
　　結論：
　　1．High-Fe++MWCNTs與細胞孵育72h、當濃度大于10μ