基于糖譜法比較不同茶多糖結(jié)構(gòu)特征及酶法修飾抗氧化活性研究.pdf

1、本研究應(yīng)用糖譜法對(duì)6種茶源多糖建立一種特異性強(qiáng)、選擇性高的表征多糖化學(xué)特征性圖譜的新方法，為茶源多糖質(zhì)量控制研究提供思路;同時(shí)，在酶法修飾后，結(jié)合體外抗氧化生理活性指標(biāo)，進(jìn)一步篩選出活性強(qiáng)的多糖酶解產(chǎn)物，為茶源多糖保健食品開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　主要工作內(nèi)容如下:
　　1.基于星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)面的茶多糖優(yōu)化提取和分離除雜
　　選用具有精度更高的非線性數(shù)學(xué)模型擬合方法，引入星點(diǎn)設(shè)計(jì)CCD方法，結(jié)合效應(yīng)面RSM首次報(bào)道了優(yōu)選

2、茶樹(shù)花的制備工藝。在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，最佳方法結(jié)果為:料液比1∶14.5，時(shí)間2.08，溫度79.1。比較預(yù)測(cè)值和實(shí)驗(yàn)值的偏差絕對(duì)值均小于5％。結(jié)果表明，所建立的數(shù)學(xué)模型具有良好的預(yù)測(cè)性，所選茶樹(shù)花多糖提取工藝條件重現(xiàn)性好。
　　采用沸水提醇沉法提取得到6種粗多糖（人工高硒多糖、人工低硒多糖、人工空白多糖、天然富硒多糖、鄧村綠茶多糖、茶樹(shù)花多糖），其中總糖含量由大到小為人工空白多糖＞茶樹(shù)花多糖＞鄧村綠茶多糖＞人工低硒多糖＞人工高硒

3、多糖＞天然富硒多糖，茶樹(shù)花多糖較高。BCA法分析可知，多糖中還存在一定含量的蛋白，說(shuō)明所得多糖均為糖蛋白。
　　2.基于糖譜法的茶多糖GPC圖譜構(gòu)建、分子量及單糖測(cè)定
　　糖譜法是針對(duì)多糖結(jié)構(gòu)特征建立的一種特異性強(qiáng)、選擇性高的表征多糖化學(xué)特征性圖譜的新方法，不同茶源多糖建立的指紋凝膠色譜GPC具有一定特異性，存在3-4個(gè)峰。在最適酶解后，對(duì)比酶解前后結(jié)果發(fā)現(xiàn)，酶解GPC特征指紋圖譜能很好的指向多糖的分子量質(zhì)量和分布，如需要區(qū)

4、分人工低硒多糖和茶花多糖、高硒多糖、天然富硒多糖等其他茶源多糖，在透明質(zhì)酸酶催化作用后，人工低硒多糖并沒(méi)有出現(xiàn)相應(yīng)的新峰或峰的消失，然而其他多糖均有新峰的產(chǎn)生，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)不同茶源多糖的快速有效區(qū)分。
　　分子量分布結(jié)果表明，六種多糖均屬于粗多糖，存在3-4個(gè)分子峰，分子量分布主要在20萬(wàn)左右和200-300萬(wàn)重均分子量，均存在寡糖片段。不同糖苷酶水解后，不同茶源多糖呈現(xiàn)出不同水解糖片段。如茶樹(shù)花多糖存在四個(gè)峰，重均分子量分別是25

5、73536，249052，4650.88，690.30，人工低硒多糖存在三個(gè)峰，重均分子量分別是3667830，272319，1342.82。不同茶源多糖在酶解前后的對(duì)于茶樹(shù)花多糖為而言，加入纖維素酶后，分子量分布為10萬(wàn)和200萬(wàn)為主，跟原茶樹(shù)花相比，分子量分布為20萬(wàn)和200萬(wàn)，說(shuō)明茶樹(shù)花多糖的主鏈上存在β-1，4-葡萄糖苷鍵，對(duì)于主鏈也有一定作用;此外，原茶樹(shù)花多糖的其他分子量分布為4650.88、690.30，纖維素酶催化水解后

6、重均分子量為1535.89、407.11、133.25，小片段的糖鏈出現(xiàn)說(shuō)明纖維素酶可能有效水解茶樹(shù)花多糖支鏈。單糖組成分析表明，人工高硒多糖、人工低硒多糖、人工不富硒多糖、天然富硒多糖、鄧村綠茶多糖、茶樹(shù)花多糖均含有鼠李糖、果膠糖（阿拉伯糖）、半乳糖、葡萄糖，具有高度相似的單糖組成。因此，本實(shí)驗(yàn)方法有利于表征茶源多糖的大分子特性，可為茶源多糖質(zhì)量控制作參考。
　　3.茶多糖的酶法修飾改性及其對(duì)體外抗氧化活性研究酶法修飾改性是獲取

7、高活性茶多糖的重要手段。首先，建立了一種基于96孔板體外抗氧化(DPPH)篩選方法，最佳條件為:總反應(yīng)體積設(shè)置為200ul（多糖樣品50ul和DPPH溶液150ul），孵育溫度設(shè)置為25℃，避光顯色反應(yīng)30分鐘，514nm測(cè)定。
　　不同酶解后，六種多糖的活性相差較大，其中茶樹(shù)花多糖活性較好，果膠酶酶解后抗氧化活性最好，如茶樹(shù)花多糖EC50為177.2ug/ml，與葡聚糖酶酶解后活性相當(dāng)，EC50為183.5ug/ml，果膠酶酶解

8、后和纖維素酶酶解后的活性相當(dāng)，EC50為162.6ug/ml、166.9ug/ml，DPPH清除能力提高了8.2％、6.1％。結(jié)果提示，用糖苷酶適當(dāng)水解茶多糖能夠提高其清除自由基能力，達(dá)到改善其活性的目的。茶多糖酶法修飾后活性提高與其分子鏈變化有較大關(guān)聯(lián)，茶多糖經(jīng)過(guò)酶法修飾改性后無(wú)論是重均分子量還是數(shù)均分子量都明顯變小，酶法修飾后出現(xiàn)的小片段糖片段分散系數(shù)多數(shù)為1.0-1.3，提示茶多糖分子鏈轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄬?duì)均一性。
　　結(jié)合多糖的化學(xué)