印楝素活性成分對照品的分離制備.pdf

1、農(nóng)業(yè)害蟲是造成農(nóng)作物減產(chǎn)、危害糧食安全的一個重要原因，但是，由于防治害蟲而過度使用化學(xué)農(nóng)藥所帶來的環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留以及抗藥性等問題日益突出。植物源農(nóng)藥以及其他生物源農(nóng)藥和防治手段的應(yīng)用為解決這一嚴(yán)峻的境況提供了很好的途徑。印楝素是一類具有很好殺蟲活性的化合物，主要從印楝（ Azadirachta indica.A.juss）種仁中提取，已在多個國家登記使用。目前市場上缺乏印楝素標(biāo)準(zhǔn)品/對照品，不能滿足印楝素類農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量控制和殘留檢測

2、等需求。
　　本文利用反相制備高效液相色譜（RP-PHPLC），建立了印楝粗提物中印楝素活性成分對照品的分離制備方法；構(gòu)建了印楝葉片中印楝素 A、B提取、凈化和檢測方法，初步評價了市售印楝素制劑的質(zhì)量，主要研究結(jié)果如下：
　　1.利用RP-PHPLC方法，從印楝粗提物中分離制備了11種印楝素活性成分，發(fā)現(xiàn)1種新化合物；通過NMR和HPLC Q-TOF鑒定了其結(jié)構(gòu)，10種印楝素類化合物分別是印楝素A、B、D、H、I、Nimbi

3、n、Deacetylnimbin、Salannin、Deacetylsalannin以及Azadiradione，10種印楝素類成分對照品的純度均＞98％。
　　2.新化合物2H,3H-環(huán)戊[b]呋喃[2’,3’:4,5]萘[2,4-d]庚內(nèi)酯-[3,7]呋喃-6醋酸,3-(乙酰)-8-(3-呋喃)-2a,4a,4b,4c,5,5a,6,6a,8,9,9a,10a,10b-十三氫-2a,5a,6a,5-四甲基-3-[[(2E)-2

4、-甲基-1-氧-2-丁烯]氧]-甲酯也屬于印楝素類化合物，將其命名為印楝素R。以枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）和金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）為靶標(biāo)，采用刃天青顯色-微量稀釋法，初步評價了印楝素R的抑菌活性。結(jié)果表明，印楝素R對2種供試細(xì)菌的MIC值分別為25 mg/L和50 mg/L，MBC值均為50 mg/L，與陽性對照硫酸卡那霉素的抑菌效果相當(dāng)，其中，印楝素R對枯草芽孢桿菌MIC值

5、低于硫酸卡那霉素，硫酸卡那霉素對供試菌的MIC值及MBC值均為50 mg/L。
　　3.構(gòu)建了印楝葉片中印楝素A、B的HPLC檢測方法。印楝葉片采用甲醇勻漿提取，ENVI-Carb SPE小柱凈化印楝葉片提取物。通過HPLC檢測，在添加水平為10~30μg/g范圍內(nèi)，印楝素A的平均回收率在86.30%~102.03%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1.03%~4.28%之間；印楝素B的平均回收率為112.98%~127.57%之間，