汕頭牛田洋鋸緣青蟹病害發(fā)生的環(huán)境因素及中草藥防治研究.pdf

1、鋸緣青蟹屬肉食性、廣鹽、廣溫性海水經(jīng)濟(jì)甲殼動(dòng)物，是我國(guó)東南沿海地區(qū)重要的海洋經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖蟹類(lèi)，也是汕頭市的傳統(tǒng)特色優(yōu)勢(shì)水產(chǎn)養(yǎng)殖品種。自2004年秋冬以來(lái)，每年9～11月，汕頭牛田洋養(yǎng)殖區(qū)的青蟹病害嚴(yán)重，經(jīng)濟(jì)損失較大。為了探討青蟹病害的原因，尋找有效的病害治療和防控方法，本課題組對(duì)此進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究?，F(xiàn)已查明：副溶血弧菌、嗜水氣單胞菌和寄生性腰鞭毛蟲(chóng)是牛田洋青蟹的主要病原。本文主要從養(yǎng)殖水體理化因子和生物因子等方面，探討了青蟹病害發(fā)生與養(yǎng)殖

2、環(huán)境的關(guān)系。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下：
　　 ⑴牛田洋青蟹病害爆發(fā)的環(huán)境因素從牛田洋圍墾區(qū)大順公司的水產(chǎn)養(yǎng)殖基地選取4個(gè)100畝左右的青蟹養(yǎng)殖池塘作為采樣、監(jiān)測(cè)點(diǎn)，于2007年和2008年的4～12月，每月進(jìn)行1～2次的定點(diǎn)環(huán)境監(jiān)測(cè)、采樣及病害調(diào)查，分析測(cè)定如下指標(biāo)：水體的溫度、鹽度、溶解氧、pH，亞硝態(tài)氮(NO2--N)、硝態(tài)氮(NO3--N)、銨態(tài)氮(NH4+-N)及無(wú)機(jī)磷(PO43--P)的含量，化學(xué)耗氧量(COD)，細(xì)菌數(shù)

3、量(弧菌和異養(yǎng)菌)；池塘底泥的細(xì)菌數(shù)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在07年和08年，養(yǎng)殖環(huán)境各因子與病害爆發(fā)都呈現(xiàn)出明顯的季節(jié)性變化，且變化趨勢(shì)基本一致。4～8月，青蟹健康狀況良好，基本沒(méi)有病害發(fā)生；自9月中下旬開(kāi)始出現(xiàn)青蟹病害，10月份病害尤為嚴(yán)重，主要表現(xiàn)為黑鰓、甲殼黃斑、體內(nèi)腹水等癥狀。兩年內(nèi)，各指標(biāo)的變化范圍：NH4+-N 76.63～235.63 μg·L-1、NO2--N6.15～27.75μg·L-1、NO3--N22.33～174.83

4、 μg·L-1、PO43--P 8.27～44.81 μg·L-1、水體異養(yǎng)菌27.25×105～157.93×105 cfu·L-1、水體弧菌9.75×103～116.75×103 cfu·L-1、底泥異養(yǎng)菌27.75×105～733.25 × 105 cfu·dw-1·g-1、底泥弧菌0.13×103～141.65×103 cfu·dw-1·g-1，它們的峰值均出現(xiàn)在病害高發(fā)的9～10月份；溶解氧和pH的變化范圍分別是4.12～7.

5、80 mg·L-1和6.21～8.22，它們的低值也出現(xiàn)在病害高發(fā)的9～10月份。結(jié)果表明：水體理化因子的惡化和條件致病微生物的大量增生是青蟹病害爆發(fā)的重要原因之一。
　　 ⑵中草藥防治青蟹細(xì)菌性病害的初步研究通過(guò)藥敏紙片法和倍比稀釋法，分別測(cè)定了五倍子、連翹、貫眾、地榆、大黃、黃芩、烏梅、黃連、馬齒莧、石榴皮、益智仁、五味子等12 味中草藥對(duì)副溶血弧菌和嗜水氣單胞菌的藥物敏感性、最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)。

6、結(jié)果顯示，五倍子、烏梅和黃蓮等對(duì)兩菌株均具有明顯的抑制作用，抑菌圈都大于19 mm，MIC均小于3.12 mg·mL-1。其中五倍子對(duì)兩菌株的抑殺效果最明顯，對(duì)副溶血弧菌和嗜水氣單胞菌的抑菌圈分別達(dá)到37.00 和42.29 mm，對(duì)兩株菌的MIC和MBC分別為0.19 和0.39 mg·mL-1。黃蓮、石榴皮、馬齒莧、大黃、五味子等對(duì)菌株有一定的抑殺作用，但貫眾、石榴皮和益智仁的抑殺作用不明顯。接著，利用五倍子對(duì)青蟹副溶血弧菌病進(jìn)行防

7、治試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)設(shè)置4 個(gè)組：陰性對(duì)照組(青蟹注射0.1 mL生理鹽水，不藥?。?、陽(yáng)性感染組(注射0.1mL8×107cfu·mL-1副溶血弧菌，不藥?。?、五倍子治療組(注射感染菌株后8h，用20mg·L-1藥液進(jìn)行藥浴3 天）和五倍子對(duì)照組(注射生理鹽水，藥浴同治療組），每組2 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只青蟹。通過(guò)比較各組間青蟹的累積死亡率(CM)，血淋巴中的細(xì)菌數(shù)量(TBC)及總血細(xì)胞數(shù)量(THC)，血清中的酚氧化酶(PO)、溶菌酶(LSZ)

8、、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)及堿性磷酸酶(AKP)的活力，血清抗菌活力(ABA)、葡萄糖(Glu)及可溶性蛋白(Pro)的含量等免疫與代謝指標(biāo)，以探究五倍子對(duì)感染副溶血弧菌青蟹的治療效果，評(píng)估藥浴對(duì)健康青蟹是否有副作用。結(jié)果顯示，陽(yáng)性感染組在染菌后第4 的CM即達(dá)100％，TBC顯著增加，在感染二天后就達(dá)到105數(shù)量級(jí)，同時(shí)THC、PO、LSZ、ABA等指標(biāo)較陰性對(duì)照組明顯要低；五倍子治療組7天

9、的CM為25％，與陽(yáng)性感染組相比，其TBC、THC、PO、LSZ、ABA等指標(biāo)在治療后第二天都有顯著改善，到第七天時(shí)，各指標(biāo)基本恢復(fù)到健康水平、與陰性對(duì)照組無(wú)顯著差異；與陰性對(duì)照組相比，五倍子對(duì)照組青蟹除THC稍有降低外，其他指標(biāo)均沒(méi)有明顯變化。結(jié)果表明，副溶血弧菌能引起青蟹較高的死亡率，注射107cfu·mL-1菌液4天后即全部死亡；20mg·L-1的五倍子藥液能有效治療青蟹由副溶血弧菌引起的疾病，該濃度藥液對(duì)青蟹的免疫與代謝指標(biāo)基本