馬立克氏病病毒RB1B株感染雞的蛋白質(zhì)組、轉(zhuǎn)錄組學(xué)及天然免疫機(jī)理研究.pdf

1、馬立克氏病病毒RBlB株感染雞的蛋白質(zhì)組、轉(zhuǎn)錄組學(xué)及天然免疫機(jī)理研究ProteomicsandtranscripteomicsofMarek’Sdiseasevirusinfectionandinnateimmunemachnism博士生：胡序明導(dǎo)師：秦愛建教授專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)資助項(xiàng)目：國家自然基金31272560國家自然基金31072135長江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃IRT0978江蘇省優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目省高校自然科學(xué)重大研究項(xiàng)目Gran

2、tNo12KJA23001江蘇省普通高校研究生科研創(chuàng)新計(jì)劃CXZZl209162013年揚(yáng)州大學(xué)優(yōu)秀博士學(xué)位論文基金資助項(xiàng)目揚(yáng)州大學(xué)2014年6月?lián)P州大學(xué)博士學(xué)位滄文研究證明RBIB感染SPF雞后，胸腺組織在感染后第21天、28天和35天呈現(xiàn)嚴(yán)重萎縮，在第42天逐漸恢復(fù)正常。以胸腺／體重為參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表明，攻毒組在第7天、21天、28天和35天差異顯著(P005)。在胸腺組織蛋白樣品制各、水化、等電聚焦、平衡等條件的摸索并建立

3、雞胸腺蛋白質(zhì)組學(xué)方法測定的基礎(chǔ)上，利用二維電泳和質(zhì)譜分析技術(shù)共鑒定出119個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，這些差異蛋白點(diǎn)主要集中在感染MDV后21、28和35天，與病理結(jié)果一致。GO注釋結(jié)果顯示：這些蛋白涉及到廣泛的生物學(xué)過程，主要包括代謝、免疫、細(xì)胞凋亡和死亡、應(yīng)激以及腫瘤等各個(gè)方面：其中，有七類蛋白共20個(gè)差異蛋白點(diǎn)(包括巨噬細(xì)胞游走抑制因子、熱休克蛋白90等)，與免疫、腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移等直接相關(guān)。RealtimePCR對這些主要差異蛋白進(jìn)

4、行了驗(yàn)證。對主要差異蛋白的功能以及相互作用關(guān)系進(jìn)行了分析討論，為進(jìn)一步研究MDV宿主相互作用提供了胸腺蛋白質(zhì)組圖譜，2RBlB感染雞胸腺病毒和宿主基因轉(zhuǎn)錄組表達(dá)變化本研究利用AffymetrixGeneChipChickenGenomeArrays(包含32773個(gè)雞轉(zhuǎn)錄物和684個(gè)病毒轉(zhuǎn)錄物)對MDV超強(qiáng)毒RBIB感染雞胸腺進(jìn)行了全基因組芯片分析。研究結(jié)果表明，在RBIB感染后第7、14、21和28天的雞胸腺有86個(gè)病毒差異表達(dá)基因。

5、在感染后第7天，檢測到47個(gè)主要涉及病毒復(fù)制和免疫逃避的病毒基因。大多數(shù)病毒基因的表達(dá)在第21和28天增加，而在14天減少。與其他組織不同的是，我們發(fā)現(xiàn)在雞胸腺組織中，病毒潛伏感染期建立時(shí)間在第14天。該研究結(jié)果提供了馬立克氏病毒在雞胸腺組織中的動(dòng)態(tài)表達(dá)規(guī)律。雞胸腺對MDV反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析結(jié)果表明，不同感染期共有594個(gè)與免疫、腫瘤、細(xì)胞周期與凋亡相關(guān)的差異基因，這些差異基因涉及到22條信號(hào)通路。GO分析顯示在第7天上調(diào)表達(dá)的基因涉及

6、免疫和炎癥應(yīng)答，而在第21和28天上調(diào)表達(dá)的基因涉及血管發(fā)生、細(xì)胞骨架重排、細(xì)胞粘附、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。GAzer分析顯示上調(diào)的生物學(xué)過程包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞基質(zhì)粘附、血管發(fā)生、免疫和炎癥應(yīng)答，其他生物學(xué)過程包括凋亡、細(xì)胞周期、有絲分裂、DNA復(fù)制、信使RNA加工、蛋白折疊、修飾和轉(zhuǎn)運(yùn)等發(fā)生下調(diào)。Pathway分析發(fā)現(xiàn)：與免疫、細(xì)胞周期與凋亡途徑下調(diào)，而與腫瘤相關(guān)的信號(hào)途徑上調(diào)。本研究結(jié)果提供了病毒感染對宿主基因表達(dá)的差異表達(dá)圖譜，為進(jìn)一步解釋馬