厚皮海綿化學成分與雙齒圍沙蠶糖苷酶的研究.pdf

1、海綿作為濾食性海洋生物，它能夠產(chǎn)生許多具有新穎結(jié)構(gòu)的化學成分，這些化學成分往往具有抗腫瘤、抗菌、抗炎、降壓等生物活性。但對于澳大利亞厚皮海綿（ Craniella australiensis）化學成分的研究報道較少。雙齒圍沙蠶(Perinereis aibuhitensis)中也含有大量的生物活性物質(zhì)，尤其是糖苷酶類活性物質(zhì)。本文針對這2種海洋生物的生物活性物質(zhì)進行了研究，以期為海洋生物的利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括

2、：⑴澳大利亞厚皮海綿經(jīng)75％乙醇熱提取后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得到浸膏。利用一系列色譜技術(shù)和重結(jié)晶等方法分別對乙酸乙酯和正丁醇萃取浸膏進行分離提取純，得到3個化合物。通過理化常數(shù)測定及NMR數(shù)據(jù)分析，確定了2個化合物的結(jié)構(gòu)，分別為Aldisin和2-Bromoaldisin。這2個化合物均是首次從該屬中分離得到。⑵澳大利亞厚皮海綿各層浸膏抑制ACE酶活性實驗表明，各層浸膏均具有抑制ACE酶活性，抑制作用均有具有劑量依賴性，

3、且乙酸乙酯層浸膏抑制作用最強，其IC50為2.61mg/mL。⑶采用CCK-8法對澳大利亞厚皮海綿總浸膏進行體外抗腫瘤實驗結(jié)果表明，總浸膏濃度為200mg/mL時，對人胃癌細胞AGS、人肝癌細胞HepG2、人卵巢癌細胞SKOV3均具有抑制活性。采用CCK-8法對得到的 Aldisin和2-Bromoaldisin進行體外抗腫瘤實驗，結(jié)果表明Aldisin和2-Bromoaldisin對人克隆結(jié)腸腺癌細胞Caco-2、人結(jié)腸癌細胞HCT1

4、16、人肝癌細胞7721、人膠質(zhì)瘤細胞U251以及人腎癌細胞A498都具有抑制活性。其中Aldisin對7721細胞抑制作用最強，IC50為67.56±3.06μg/mL。這2種化合物可作為潛在的抗腫瘤藥物進行進一步的研究。⑷通過80%飽和度(NH4)2SO4從雙齒圍沙蠶中提取得到粗蛋白，粗蛋白依次經(jīng)過DEAE-52離子交換層析、Sephadex G-100凝膠過濾層析進行提純分離。對所得到的蛋白進行進行糖苷酶活性檢測，發(fā)現(xiàn)其具有β-葡

5、萄糖苷酶活性、β-半乳糖苷酶活性以及α-甘露糖苷酶活性，酶提取回收率分別為39.5%、20.3%、1.9%。雙齒圍沙蠶β-葡萄糖苷酶最適溫度為50℃，最適pH為7，Km為8.14×10-5 M，Vmax為3.19×10-4 M/h。雙齒圍沙蠶β-半乳糖苷酶最適溫度為50℃，最適pH為6，Km為1.20×10-4 M，Vmax為1.63×10-4 M/h。雙齒圍沙蠶α-甘露糖苷酶最適溫度為70℃，最適pH為4，Km為6.17×10-5 M