小麥醇溶蛋白的提取優(yōu)化、點(diǎn)修飾調(diào)控及其產(chǎn)物的特性研究.pdf

1、本研究以乙醇粗提獲得的小麥醇溶蛋白懸濁物為底物，利用外源氨基供體調(diào)控微生物源谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶(Microbial Transglutaminase，MTGase，EC2.3.2.13)盼點(diǎn)修飾反應(yīng)途徑，結(jié)合其點(diǎn)修飾產(chǎn)物的特征分析，以證實(shí)點(diǎn)修飾改性可以提高小麥醇溶蛋白底物的乳化穩(wěn)定性。主要內(nèi)容包括以下三部分:
　　一、小麥醇溶蛋白提取。將溶劑提取法和等電點(diǎn)沉淀法相結(jié)合并輔以超聲處理以實(shí)現(xiàn)小麥醇溶蛋白的分離，提取高得率、小粒徑的小麥醇溶

2、蛋白粗提物(Wheat GliadinCrude Extracts，EXTs)。通過(guò)乙醇濃度A、檸檬酸緩沖液濃度B和超聲時(shí)間C三個(gè)單因素試驗(yàn)，確定蛋白得率均顯著的最佳區(qū)域，用于三因素三水平的CCD響應(yīng)面設(shè)計(jì)。單因素試驗(yàn)結(jié)果顯示A、B、C的最佳區(qū)域分別在40％～60％、5mM～15mM、20 min～40 min之間，響應(yīng)面分析得知，當(dāng)乙醇濃度為60％，緩沖液濃度為5mM，超聲時(shí)間為29.67 min時(shí)，可獲得最優(yōu)解。
　　二、MT

3、Gase點(diǎn)修飾反應(yīng)途徑調(diào)控。選用甘氨酸乙酯(Ethylglycinate，Gly-O-Et)、6-氨基己酸(6-Epsilon-Aminocaproic Acid，EACA)、乙醇胺(Monoethanolamine，MEA)作為氨基供體，分別與不同水解程度的小麥醇溶蛋白微粒懸濁體系(EXTs與純凈水按1∶4體積混合制備)進(jìn)行不同時(shí)長(zhǎng)的點(diǎn)修飾反應(yīng)，用衍生試劑4-二甲氨基偶氮苯磺酰氯(Dabsyl-Cl)測(cè)定氨基供體殘留量，最后以乳化穩(wěn)定

4、性為指標(biāo)判斷水解、點(diǎn)修飾對(duì)點(diǎn)修飾產(chǎn)物的影響。結(jié)果顯示，Gly-O-Et最適合與未水解的微粒懸濁體系進(jìn)行點(diǎn)修飾反應(yīng)，且點(diǎn)修飾反應(yīng)2h時(shí)對(duì)應(yīng)的產(chǎn)物具有最好的乳化穩(wěn)定性;EACA最適合與水解60 min的微粒懸濁體系進(jìn)行點(diǎn)修飾反應(yīng)，但與未水解的空白組點(diǎn)修飾反應(yīng)4h時(shí)對(duì)應(yīng)的產(chǎn)物具有最好的乳化穩(wěn)定性;MEA最適合與水解30 min的微粒懸濁體系進(jìn)行點(diǎn)修飾反應(yīng)，但與未水解的空白組反應(yīng)2h時(shí)對(duì)應(yīng)的產(chǎn)物具有最好的乳化穩(wěn)定性。
　　三、小麥醇溶蛋白

5、點(diǎn)修飾產(chǎn)物特征分析。選擇乳化穩(wěn)定性最佳且氨基供體種類不同的點(diǎn)修飾產(chǎn)物（參照第二部分分析結(jié)果），進(jìn)行特征分析。結(jié)果顯示，傅里葉紅外光譜(Fourier Infrared Spectrum，F(xiàn)TIR)可以有效判斷小麥醇溶蛋白粗物與其點(diǎn)修飾產(chǎn)物之間的基團(tuán)差異;點(diǎn)修飾反應(yīng)基團(tuán)的不同會(huì)賦予點(diǎn)修飾產(chǎn)物不同的熱穩(wěn)定性;點(diǎn)修飾反應(yīng)對(duì)原粗提物的粒徑和電位造成的影響有限;基于吸附能公式中對(duì)三相接觸角的要求，本研究中的EACA點(diǎn)修飾產(chǎn)物符合制備Pickeri