山羊精液保存技術(shù)研究.pdf

1、山羊精液保存技術(shù)可提高優(yōu)秀種公羊的利用效率，加快品種改良步伐，便于精液長(zhǎng)途運(yùn)輸，降低疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)。但目前山羊精液低溫保存和冷凍保存技術(shù)都還不成熟，需要進(jìn)一步研究完善。本研究以安徽白山羊?yàn)閷?duì)象，系統(tǒng)研究了不同因素對(duì)山羊精液低溫及冷凍保存效果，內(nèi)容如下：
　　1、pH對(duì)山羊精液低溫保存的影響。采集的混精均分成5份，分別用pH為6.15、6.25、6.35、6.45以及6.80的稀釋液稀釋?zhuān)?℃冰箱保存，每?jī)商鞕z測(cè)精液品質(zhì)。結(jié)果：保存2

2、d后，pH6.35組的精子活力顯著高于其他組（P<0.05）；在保存的第2、6、8、10、12d，pH6.35組的質(zhì)膜完整率及頂體完整率顯著高于其他組（P<0.05)；用pH6.35的稀釋液進(jìn)行低溫保存精液，在保存4、10、12d時(shí)檢測(cè)前提升緩沖液pH至7.2，活力均顯著高于未提升組（P<0.05）。
　　2、緩沖液滲透壓對(duì)山羊精液低溫保存的影響。采集的混精均分成4份，分別使用滲透壓為330mOsm、350mOsm、375mOsm

3、、400mOsm的稀釋液進(jìn)行稀釋?zhuān)?℃冰箱保存，每?jī)商鞕z測(cè)精液質(zhì)量。結(jié)果：保存8d后，滲透壓為375mOsm組的活力顯著高于其他各組（P<0.05)、保存6天后375mOsm組的質(zhì)膜完整率、頂體完整率顯著高于其他各組（P<0.05)。
　　3、使用上述優(yōu)化了的低溫保存方法低溫保存后進(jìn)行人工授精，用鮮精、保存3d、6d、9d的精液輸精，結(jié)果低溫保存3d、6d的不返情率大于70％，達(dá)到了輸精的要求，低溫保存9d的不返情率雖然顯著低于第

4、3d（P<0.05)，但也達(dá)到63.11%。
　　4、通過(guò)一系列試驗(yàn)，優(yōu)化了山羊凍精保存方案：公羊年齡4～6歲；基礎(chǔ)稀釋液組分為T(mén)ris3.07g/100mL、果糖1.26g/100mL、檸檬酸1.64g/100mL、卵黃濃度為15%；兩步稀釋?zhuān)♂尯缶用芏葹?.4×108個(gè)/mL；降溫平衡時(shí)間4h；甘油濃度為5%，添加甘油后再平衡時(shí)間為30min；距離液氮面上方預(yù)冷高度4cm，預(yù)冷10min；37℃水浴解凍30s。
　　

5、5、膽固醇（cholestero，CHL）替代卵黃（eggyork，EY）對(duì)山羊凍精質(zhì)量的影響。采集精液混合后均分成5等份，分別用添加1.0 g/L（C1組）、2.5 g/L（C2.5組）、5.0 g/L（C5組）、10.0g/L（C10組）的CHL或15%的EY（對(duì)照組）的基礎(chǔ)冷凍緩沖液稀釋冷凍。解凍后的精子運(yùn)動(dòng)學(xué)參數(shù)使用精子分析儀（SCAS）檢測(cè)，質(zhì)膜完整率通過(guò)低滲腫脹試驗(yàn)（hypoosmoticswelling test，HOST

6、）檢測(cè)，頂體完整率通過(guò)姬姆薩染色來(lái)檢測(cè)。結(jié)果顯示：對(duì)照組的凍-融精子活力、頂體完整率、曲線速率（curvvilinear velocity，VCL）、平均路徑速度（velocity of average path，VAP）顯著高于各CHL添加組（P<0.05），質(zhì)膜完整率、線性度（linearity，LIN）、前向性（straightness，STR）、擺動(dòng)性（wobble，WOB）、精完整率顯著高于C1組（P<0.05）。
　　

7、6、磷脂酰膽堿（phosphatidylcholine，PC）替代EY對(duì)山羊凍精質(zhì)量的影響。采集精液混合后均分成5等份，分別用添加10 g/L（P10）、15 g/L（P15）、20 g/L（P20）、25g/L（P25）的PC或15% EY（對(duì)照組）的基礎(chǔ)冷凍緩沖液稀釋冷凍。結(jié)果：P15組凍-融精子的活力及VCL、VAP、LIN、STR、WOB及BCF等運(yùn)動(dòng)參數(shù)與EY組差異不顯著（P>0.05）；P10、P20及P25組解凍精子活力均

8、顯著低于EY組（P<0.05）。
　　7、精子凍-融子頭部側(cè)擺幅度（amplitude of lateral head displacement，ALH）及鞭打頻率（beat-cross frequency，BCF）與C2.5、C5和C10組無(wú)顯著差異（P>0.05），但質(zhì)膜前后膜上膽固醇和磷脂含量變化。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)山羊鮮精中精子膜磷脂含量為559.5±20.23 nmol/109，膽固醇含量為320.0±16.7 nmol/109；

9、采用基礎(chǔ)稀釋液（不添加卵黃或脂質(zhì)）稀釋精液，凍-融后，精子磷脂含量為420.3±18.1 nmol/109，膽固醇含量為130.7±20.8 nmol/109；凍-融后精子磷脂、膽固醇丟失質(zhì)量比約為3.759﹕1。
　　8、PC-CHL聯(lián)合替代EY對(duì)山羊凍精質(zhì)量的影響。根據(jù)前一個(gè)試驗(yàn)研究的結(jié)果設(shè)計(jì)了以下PC-CHL聯(lián)合替代配方：基礎(chǔ)液＋19g/LPC＋1g/L CHL（P19＋C1）；基礎(chǔ)液＋18g/L PC＋2g/L CHL（P

10、18＋C2）；基礎(chǔ)液＋16g/L PC＋4g/L CHL（P16＋C4）；基礎(chǔ)液＋14g/LPC＋6g/L CHL（P14＋C6），對(duì)照組為基礎(chǔ)液＋15% EY。
　　結(jié)果：凍-融處理后，P19＋C1、P18＋C2組的精子活力、VCL、直線運(yùn)動(dòng)速度（velocity of straight-line，VSL）、VAP均與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P>0.05）；P16＋C4組的精子活力、VCL、VAP均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；P1

11、4＋C6組的精子活力顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；P16＋C4組精子凍-融后磷脂含量顯著高于其他各組（P<0.05），膽固醇含量低于EY組，但差異不顯著（P>0.05）。
　　9、將上一試驗(yàn)中P16＋C4組和 EY組的顆粒凍精用于山羊人工授精，P16＋C4組的不返情率、受胎率、產(chǎn)羔率均高于 EY組（P>0.05），但公、母比例低于EY組（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.用于山羊精液5℃低溫保存時(shí)，緩沖液最佳酸堿