超聲微泡介導MCD-microRNA干擾質(zhì)粒對大鼠心肌梗死后心功能的實驗研究.pdf

1、背景：心肌梗死是導致心力衰竭的重要原因，改善心肌梗死后心功能不全具有重要意義，現(xiàn)有的研究認為心肌能量代謝障礙在心衰的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。目前大多數(shù)研究認為抑制脂肪酸氧化或增加葡萄糖氧化，將有助于改善心臟功能。大量的研究證實超聲微泡介導外源基因在大鼠心肌中具有較強的靶向運載能力，并且不會導致不可逆的心肌損傷和影響心功能。
　　本項研究旨在構(gòu)建并篩選MLYCD基因microRNA干擾質(zhì)粒，并將其與脂質(zhì)微泡混合，在體外超聲介導下

2、，靶向心肌梗死wistar大鼠心肌釋放MCD-microRNA干擾質(zhì)粒，通過沉默心肌MLYCD基因，提高丙二酰輔酶A的含量，抑制脂肪酸的氧化，觀察其對心功能的影響及其可能存在的機制，為從代謝治療心功能不全提供新的靶點。包括以下二個部分。
　　第一部分 MLYCD基因microRNA干擾質(zhì)粒的篩選及在體外干擾效應的初步研究
　　目的：在體外觀察大鼠MLYCD基因microRNA干擾質(zhì)粒對MLNCD基因的抑制作用。
　　方

3、法：構(gòu)建大鼠MLYCD基因microRNA干擾質(zhì)粒和大鼠MLYCD基因的真核表達質(zhì)粒，將二者共轉(zhuǎn)染至HEK293細胞中，提取細胞總RNA，用實時熒光定量PCR檢測MLYCD基因mRNA表達水平，篩選最佳microRNA干擾序列。
　　結(jié)果：DNA測序表明針對大鼠MLYCD基因的microRNA干擾質(zhì)粒和MLYCD基因的真核表達質(zhì)粒構(gòu)建成功。實時熒光定量PCR結(jié)果表明干擾組1(MCD-microRNA-1)mRNA表達顯著低于陰性對

4、照組，陽性對照組和其他干擾組(P<0.05)。
　　結(jié)論：MCD-microRNA-1為最佳干擾序列，為后續(xù)研究奠定了基礎。
　　第二部分超聲微泡介導MCD-microRNA抑制心肌MOD對心肌梗死后大鼠心功能的影響
　　目的：探討通過超聲微泡介導MCD-microRNA干擾質(zhì)粒，靶向抑制心肌丙二酰輔酶A脫羧酶(MCD)后對心肌梗死后大鼠心功能的影響及其可能的機制。
　　方法：通過永久性結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支構(gòu)

5、建心肌梗死模型，將28只心肌梗死大鼠隨機分配到心肌梗死+生理鹽水組(n=7)，心肌梗死+質(zhì)粒組(n=7)，心肌梗死+超聲+質(zhì)粒組(n=7)，心肌梗死+超聲+微泡+質(zhì)粒組(n=7)，另取7只假手術+生理鹽水組作為對照。將篩選好的干擾質(zhì)粒與脂質(zhì)微泡混合，通過超聲介導轉(zhuǎn)染入心肌梗死后4周大鼠中，每4天轉(zhuǎn)染一次，連續(xù)轉(zhuǎn)染28天后通過超聲心動圖觀察左室射血分數(shù)(LVEF％)，短軸收縮率(FS％)，左室舒張末期內(nèi)徑大小(LVIDd)的變化，采用酶聯(lián)

6、免疫法檢測乳酸的變化。
　　結(jié)果：心肌梗死+超聲+微泡+質(zhì)粒組LVEF％，F(xiàn)S％高于其他心肌梗死干預組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但明顯低于假手術+生理鹽水組(P<0.05)，乳酸低于其他心肌梗死干預組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但明顯高于假手術+生理鹽水組(P<0.05)。LVIDd各心肌梗死干預組無顯著差異(P>0.05)，但明顯低于假手術+生理鹽水組(P<0.05)。
　　結(jié)論：超聲微泡介導MC