紅樹(shù)林細(xì)胞毒活性鏈霉菌061324的分子鑒定及定種.pdf

1、DNA-DNA雜交(molecular hybridization)技術(shù)是分析DNA同源性的一種有效手段,是在16S rDNA序列相似情況下確定新種的必須技術(shù)。本研究對(duì)傳統(tǒng)尼龍膜DNA-DNA雜交技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn),用核酸限制性內(nèi)切酶Sau3A分別對(duì)待測(cè)試菌株和參照菌株的基因組DNA進(jìn)行消化,再分別與不同的寡核苷酸接頭進(jìn)行連接,然后以相應(yīng)寡核苷酸接頭序列作為引物擴(kuò)增待測(cè)菌和參照菌的基因組DNA,其中參照菌株的DNA用地高辛修飾的dUTP標(biāo)記

2、。將待測(cè)菌的DNA固定于尼龍膜并與地高辛標(biāo)記的參照菌的DNA進(jìn)行雜交,再顯色。最后用DOTS分析軟件分析雜交圖,算出其間DNA-DNA雜交值。相對(duì)傳統(tǒng)的尼龍膜DNA-DNA雜交具有快速,靈敏度高和不需特殊儀器等優(yōu)點(diǎn)。
　　 菌株061324分離自文昌紅樹(shù)林土壤的一株具有細(xì)胞毒活性的放線菌,具有發(fā)達(dá)、分支、不斷裂的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲;孢子鏈長(zhǎng)、直或波曲,著生在氣絲上,孢子表面光滑,依據(jù)形態(tài)特征初步歸類為鏈霉菌。根據(jù)菌株061324

3、及相近的鏈霉菌的16S rDNA序列的系統(tǒng)發(fā)育分析,菌株061324與Streptomycescheonanensis NBRC100940T和Streptomyces carpaticus AS4.1621T處于一個(gè)獨(dú)立的分支,16S rDNA序列的相似性分別為99.2％和99.4％,DNA-DNA雜交的結(jié)果分別為46.7％和48.06％。菌株061324的細(xì)胞壁組分中含有LL二氨基庚二酸和甘氨酸,不含特征性糖;甲基萘醌組分為MK-9