腸三葉因子對(duì)腸道急性移植物抗宿主病的保護(hù)與自噬有關(guān).pdf

1、目的:
　　觀察骨髓移植后急性移植物抗宿主疾病中自噬的表達(dá)變化以及探究預(yù)防性使用腸三葉因子對(duì)小鼠急性移植物抗宿主疾病中腸道的保護(hù)作用與自噬的關(guān)系。
　　方法:
　　用主要組織相同性抗原Ⅰ類分子不完全相合的純種近交系小鼠C57BL/6(H-2b)，BALB/C（H-2d）分別作為供鼠和受鼠，經(jīng)清髓性8.0Gy全身照射(TBI)，將供鼠的骨髓細(xì)胞和脾細(xì)胞以不同比例混合后輸入受鼠體內(nèi)，建立C57BL/6（H-2b）至BALB

2、/C(H-2d)的異基因骨髓移植(allo-BMT)，誘導(dǎo)急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型。將受鼠隨機(jī)分為4組，A組3只，其余每組各15只。分別為未經(jīng)任何處理的空白組（A組），單純骨髓細(xì)胞移植組（BM組），未接受ITF治療的aGVHD組(aGVHD組)以及接受ITF治療的aGVHD組（ITF組），觀察終點(diǎn)為小鼠死亡或者移植后第30天。定期觀察各組小鼠弓背、脫毛等aGVHD臨床表現(xiàn)，記錄小鼠體重變化、外周白細(xì)胞變化和生存情況。B組、C

3、組和D組小鼠在移植后每周的最后一天隨機(jī)處死3只，取小鼠肝臟、小腸、肺臟、脾臟做病理HE染色，另取一部分小腸組織做免疫組化，觀察自噬蛋白LC3在小腸粘膜上皮細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　在aGVHD組中，小鼠在移植后10天后逐漸表現(xiàn)弓背、脫毛、體重減輕、豎毛、毛發(fā)雜亂、精神萎靡、食欲減退等典型的aGVHD臨床癥狀，以及肛周紅腫，腹瀉、血便等腸道急性GVHD表現(xiàn)，在第14天左右達(dá)到頂峰。BM組小鼠在移植后D+9天開始出現(xiàn)死亡，

4、MTS＞30，MST為26.89±2.00天，第30天存活率為82％，D+30測(cè)到白細(xì)胞總數(shù)分別為9.27±0.63，aGVHD組小鼠出現(xiàn)第一例死亡在D+6天，并在D+25天內(nèi)全部死亡，30天生存率為0，MST為17.6天，平均生存時(shí)間為19.13±2.01，最后一天測(cè)的白細(xì)胞為5.7±0.42，較BM組明顯降低(p＜0.01)。ITF組小鼠在移植后D+10天開始出現(xiàn)死亡，MTS為24，平均生存時(shí)間為23.18±2.26天，第30天存活

5、率為37％，D+30天測(cè)得白細(xì)胞為7.8±0.4，D+25天外周白細(xì)胞(7.7±0.89)較C組最后一天(D+25)的白細(xì)胞(5.29±0.42)有明顯增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。病理HE染色顯示，aGVHD組小鼠病理顯示肝細(xì)胞嗜酸性變、匯管區(qū)淋巴細(xì)胞浸潤，膽小管壞死，肝索排列紊亂，肺泡壁充血、滲出，小腸上皮細(xì)胞脫落、壞死，大面積粘膜下層暴露，粘膜下和基底層大量淋巴細(xì)胞浸潤。aGVHD病理評(píng)分為Ⅲ-Ⅳ級(jí)，ITF組小鼠病理較C

6、組表現(xiàn)減輕，肝細(xì)胞變性減少，膽小管少量破壞，腸道上皮胞個(gè)別凋亡、壞死。評(píng)分為Ⅰ-Ⅱ。BM組和A組未出現(xiàn)急性移植物抗宿主疾病。小腸組織免疫組化顯示，除BM組以外，aGVHD組和ITF治療組在第二周LC3表達(dá)到達(dá)頂峰，在第二周之后則隨著時(shí)間推移緩慢遞減，第二周末aGVHD組LC3表達(dá)水平(226±11.1)較BM組和ITF治療組（分別為123±6.0和200±8.0）明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　aGVHD組較B

7、M組比較得出，aGVHD組表現(xiàn)出明顯aGVHD癥狀，如臨床表現(xiàn)，外周血象，病理評(píng)分等方面，這表示aGVHD模型構(gòu)建成功;aGVHD組小鼠腸道自噬蛋白LC3較未出現(xiàn)GVHD的BM組表達(dá)明顯增加，且在第二周達(dá)到頂峰，并且aGVHD嚴(yán)重程度評(píng)分也在第11-15天達(dá)到頂峰，這提示腸道自噬的嚴(yán)重程度與aGVHD有關(guān)，且自噬水平的高低與移植后aGVHD的時(shí)間有關(guān);ITF治療組小鼠自噬水平較未接受ITF治療的aGVHD組自噬水平有所下降，表明與腸三葉