腺苷2A受體在肥胖相關的胰島素抵抗,肝脂肪變性和炎癥中的作用及機制.pdf

1、目的：
　　非酒精性脂肪性肝?。∟on-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)現已成為全球最重要的公共健康問題之一，嚴重危害人類健康，但NAFLD的發(fā)病機制尚不明確。NAFLD表現為肥胖相關的胰島素抵抗，肝脂肪變性及炎癥。腺苷2A受體是具有抗炎作用的G蛋白偶聯受體。本實驗擬觀察A2AR對肥胖相關的NAFLD肝脂肪變性，胰島素抵抗，炎癥的作用，并探討其具體的作用機制。
　　方法：
　　

2、（1）用Western blot方法明確C57BL/6J小鼠體內A2AR的分布情況；5-6周齡小鼠經14周低脂或高脂喂養(yǎng)，觀察不同飲食對小鼠肝臟和脂肪組織 A2AR蛋白表達，并檢測炎癥信號通路c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase1，JNK）和核轉錄因子（Nuclear factor kappa B，NFκB）的磷酸化水平，促炎因子腫瘤壞死因子α（tumer necrosis factor-alpha，T

3、NFα），白介素1β(interleukin1β，IL-1β)和白介素6（interleukin6，IL-6）的表達水平；
　?。?）構建A2AR基因敲除小鼠，將5-6周齡小鼠按基因型分為三組：A2AR基因敲除組（knockout，KO，A2AR-/-）；雜合子組（heterozygote，HET，A2AR+/-）；野生型組（wild type，WT，A2AR+/+），給予高脂飲食14周，觀察A2AR基因敲除對小鼠體重、肝臟重量、

4、攝食、糖耐量、胰島素耐量、肝脂肪變性、炎癥信號通路JNK、NFκB磷酸化水平，促炎因子，脂肪生成因子以及胰島素信號通路絲氨酸/蘇氨酸激酶（AKT）磷酸化水平的影響；
　?。?）觀察 A2AR基因缺陷對三種基因型小鼠脂肪組織重量，脂肪組織炎癥信號通路JNK、NFκB磷酸化水平，促炎因子，脂肪生成因子以及胰島素信號通路絲氨酸/蘇氨酸激酶（AKT）磷酸化水平的影響；用流式細胞儀檢測小鼠脂肪組織巨噬細胞浸潤和極化；通過A2AR-/-和A2

5、AR+/+小鼠的巨噬細胞與A2AR+/+小鼠肝細胞共培養(yǎng)，觀察巨噬細胞中A2AR對肝細胞脂肪變性，AKT的磷酸化水平的影響。
　　結果：
　　（1）小鼠體內A2AR廣泛分布，高脂飲食激活炎癥信號通路，并增加小鼠肝臟和脂肪組織A2AR的表達；
　　（2）與野生型小鼠相比，A2AR-/-小鼠在攝食無明顯差異的情況下，體重和肝臟重量增加，糖耐量、胰島素耐量受損，肝脂肪變性明顯，肝臟組織炎癥信號通路激活，促炎因子分泌增多，胰島

6、素信號通路受抑；
　?。?）與野生型小鼠相比，A2AR-/-小鼠脂肪含量增多，脂肪組織炎癥通路激活，促炎因子分泌增多，胰島素信號通路受抑；巨噬細胞浸潤增多，抗炎的M2型向促炎的M1型極化，巨噬細胞炎癥通路激活，A2AR-/-小鼠的巨噬細胞與A2AR+/+小鼠肝細胞共培養(yǎng)，肝細胞脂肪變性增多，且胰島素信號通路受抑。
　　結論：
　　A2AR主要通過抑制炎癥反應改善肥胖相關的NAFLD。本研究首次系統(tǒng)闡明A2AR對NAFL