Klotho真核表達載體的構(gòu)建及其干預自發(fā)性高血壓大鼠高血壓進程與心臟損害的作用機制研究.pdf

1、目的：RT-PCR擴增小鼠全長Klotho(KL)cDNA，構(gòu)建pAAV.mKL重組質(zhì)粒，驗證其在COS-7細胞中的表達情況；重組質(zhì)粒pAAV.mKL與pHelper和pAAV.RC三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染AAV-293細胞，包裝rAAV.mKL；并利用rAAV.mKL轉(zhuǎn)染SHR大鼠，研究KL過表達對SHR大鼠血壓進程及心肌肥大、心肌纖維化的影響，為KL在高血壓病及其心臟損傷中的基因治療提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法：(1)從小鼠腎臟組織中提取總R

2、NA，通過RT-PCR獲得全長KL cDNA，將其克隆到pAAV-HnGFP質(zhì)粒上，構(gòu)建重組質(zhì)粒pAAV-mKL，將其轉(zhuǎn)染COS-7真核表達細胞，并通過觀察綠色熒光蛋白的表達、RT-PCR和免疫熒光檢測KL在COS-7細胞中的表達；(2)應用三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的方法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入AAV-293細胞，包裝獲得rAAV.mKL；(3)應用rAAV.KL轉(zhuǎn)染SHR大鼠，研究KL過表達對SHR大鼠血壓進程及其心肌肥大、心肌纖維化的影響。
　　結(jié)

3、果：(1)通過RT-PCR獲得全長小鼠KL cDNA片斷，成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pAAV.mKL，驗證了其使COS-7細胞KL表達增加；(2)三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染AAV-293細胞，包裝出rAAV.mKL，提取病毒DNA，PCR驗證rAAV.mKL攜帶有小鼠KL cDNA片段；(3)KL表達上調(diào)可以阻止高血壓進程，降低心臟體重指數(shù)，抑制心肌肥大和心肌纖維化。
　　結(jié)論：通過pAAV.mKL轉(zhuǎn)染COS-7細胞，可以上調(diào)其KL的表達。rAAV.mK