應用實時熒光PCR方法鑒別食品中的鴨源性成分.pdf

1、食品中肉類鑒別對維護市場公平和消費者權(quán)益有重要意義。食品的鑒別和質(zhì)量控制需要對來源不明確的DNA進行靈敏的檢測。食品中肉類成分的鑒別與分析技術(shù)已逐步形成了以核酸檢測為基礎(chǔ)的方法體系，其檢測精度可達屬與亞屬水平。本研究主要利用多種實時熒光PCR技術(shù)對食品中的鴨源性成分進行了鑒別，探究了不同加工方式對普通實時熒光PCR和巢式實時熒光PCR的影響，并建立了鑒別血旺中豬雞鴨三種血液成分的多重實時熒光PCR檢測方法。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下:

2、>　　1.含有擴增內(nèi)標的實時熒光PCR法檢測食品中的鴨肉成分
　　基于鴨的細胞核中特異性基因序列(IL-2)，設(shè)計相應引物和TaqMan探針，在此基礎(chǔ)上構(gòu)建一段隨機序列作為擴增內(nèi)標，設(shè)計內(nèi)標探針，通過對PCR反應體系和反應條件的優(yōu)化，建立了添加有擴增內(nèi)標的用于檢測食品中鴨肉成分的實時熒光PCR方法。通過擴增曲線和Ct值分析該方法的特異性、檢測限和靈敏度，并探究三種不同加工方式對該檢測方法的影響。結(jié)果表明:TaqMan探針實時熒光P

3、CR法具有很高的特異性，本方法可以檢測出0.05ng的鴨DNA，其靈敏度可達0.1％。高溫高壓處理會降低該檢測方法的靈敏度，煮制和超高壓處理對檢測靈敏度無顯著影響。
　　2.巢式實時熒光PCR法檢測食品中的鴨肉成分
　　為提高實時熒光PCR在檢測加工肉制品時的靈敏度，本研究建立了用于鴨肉鑒別的巢式實時熒光PCR法并探究了三種不同加工方式對該方法的影響。結(jié)果表明巢式實時熒光PCR法可提高PCR檢測的檢出限和靈敏度，能夠檢測出0

4、.5pg的鴨DNA，檢測靈敏度可達0.01％。高溫高壓處理會降低其靈敏度，煮制和超高壓處理對檢測無顯著影響，該方法在對鮮肉和加工過的肉制品進行鑒別時是一種快速靈敏的檢測手段。
　　3.多重實時熒光PCR檢測血旺中鴨豬雞血液成分
　　本實驗基于動物細胞核DNA中特異性位點建立了準確可靠的多重TaqMan實時熒光PCR方法用于檢測血旺中的鴨，豬和雞血液成分。分析比較了血液提取試劑盒，血液/細胞/組織基因組DNA提取試劑盒和酚/氯