成年大鼠腦創(chuàng)傷后海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞生成對腦功能的修復(fù).pdf

1、目的：探索腦創(chuàng)傷后腦組織中神經(jīng)細(xì)胞損傷和神經(jīng)細(xì)胞生成現(xiàn)象的自然過程和分子機(jī)制,證實神經(jīng)細(xì)胞損傷導(dǎo)致腦功能障礙,而神經(jīng)細(xì)胞生成能促進(jìn)腦功能恢復(fù),尋找減輕神經(jīng)細(xì)胞損傷、促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生成的治療方法,最終降低腦創(chuàng)傷的病死率和致殘率,提高腦創(chuàng)傷的臨床治療水平。 方法：90只大鼠隨機(jī)分為2大組,重型創(chuàng)傷組(n=60)和對照組(n=30),所有大鼠購買后先在實驗室飼養(yǎng)2天,然后置于Morris水迷宮的水缸中做適應(yīng)性游泳一次,第二天開始Morr

2、is水迷宮訓(xùn)練,每天游泳8次,上下午各4次,每次隨機(jī)從不同入水點進(jìn)入水缸游泳,訓(xùn)練持續(xù)5天。水迷宮訓(xùn)練結(jié)束后第二天行Morris水迷宮檢測,然后按照標(biāo)準(zhǔn)化操作步驟,對實驗大鼠進(jìn)行液壓沖擊致傷,重型創(chuàng)傷組沖擊力度為3.0±0.1 ATM,對照組行同樣的手術(shù)操作,但無液壓沖擊,動物模型制作成功后,所有大鼠均行BrdU腹腔注射,100 mg/kg連續(xù)注射6天。在創(chuàng)傷后的第1、3、7、14、28天時間點進(jìn)行mNSS神經(jīng)功能評分,Morris水迷

3、宮檢測,每組分別隨機(jī)選取5只大鼠,取腦固定后海馬區(qū)連續(xù)冰凍切片,厚度30μm,海馬所有切片按順序裝在6個盛有抗凍緩沖液的小瓶中-20℃保存。在創(chuàng)傷后第35-39天行Morris水迷宮第二次訓(xùn)練,創(chuàng)傷后第56天行最后一次Morris水迷宮檢測并取腦冰凍切片保存。隨機(jī)選取腦片分別行HE、TUNEL+NeuN、BrdU+DCX、BrdU+NeuN、BrdU+GFAP染色,熒光免疫組織化學(xué)的結(jié)果在熒光顯微鏡和共聚焦顯微鏡下觀察,并記錄每張腦片陽

4、性細(xì)胞的個數(shù)。 結(jié)果： 1.在大鼠海馬液壓創(chuàng)傷后24-72小時,創(chuàng)傷組大鼠mNSS評分顯著高于對照組,隨時間延長,6天后創(chuàng)傷組與對照組無差異。 2.大鼠液壓腦創(chuàng)傷后第7天,創(chuàng)傷組Morris水迷宮成績顯著低于對照組(P<0.05),隨時間延長,創(chuàng)傷組Morris水迷宮成績逐漸升高,經(jīng)過創(chuàng)傷后第35-39天的第二次訓(xùn)練,創(chuàng)傷組與對照組差異明顯減小,但第56天后兩組間仍有差異(P<0.05)。 3.創(chuàng)傷后1-

5、3天可在大鼠海馬齒狀回顆粒下層檢測到BrdU+細(xì)胞,在門區(qū)、CA3區(qū)檢測到TUNEL+/NeuN+細(xì)胞,創(chuàng)傷組顯著多于對照組,隨時間延長,BrdU+及TUNEL+/NeuN+細(xì)胞數(shù)增多,第7天達(dá)到峰值,第14天可檢測到BrdU+/DCX+、BrdU+/GFAP+、BrdU+/TUNEL+細(xì)胞,隨后逐漸減少,第28天出現(xiàn)BrdU+/NeuN+細(xì)胞,位于顆粒細(xì)胞下層,第56天BrdU+/NeuN+位于顆粒細(xì)胞層,數(shù)量減少。 結(jié)論：

6、 1.實驗結(jié)果表明成年個體中樞神經(jīng)系統(tǒng)保留了顯著的結(jié)構(gòu)可塑空間,腦創(chuàng)傷后內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞激活并大量增殖,部分新生成的神經(jīng)細(xì)胞可分化為成熟神經(jīng)元,這可能與大鼠腦功能的自然修復(fù)過程有關(guān)。 2.大鼠海馬液壓創(chuàng)傷后,Morris水迷宮的再次訓(xùn)練能促進(jìn)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能的修復(fù),并且評價創(chuàng)傷后大鼠遠(yuǎn)期的空間學(xué)習(xí)記憶功能。Morris水迷宮訓(xùn)練能夠促進(jìn)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖,并且可能促進(jìn)新生神經(jīng)細(xì)胞分化成熟并加入功能性的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)中,以修