NNK對(duì)V79和NCTC1469細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、4-(N-甲基亞硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮（NNK）是煙草中主要的致癌物之一，具有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。本實(shí)驗(yàn)主要研究NNK在不同濃度和時(shí)間下對(duì)細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞增值、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期，以及對(duì)抗氧化基因GCLC、Nrf2和凋亡基因 Bax、Bcl-2表達(dá)的影響。在前期動(dòng)物毒理實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞（V79）和小鼠肝細(xì)胞（NCTC1469）為研究對(duì)象，運(yùn)用細(xì)胞形態(tài)學(xué)，MTT法、Hoechst33258染色，流式細(xì)胞儀、熒光

2、定量PCR等方法，研究不同濃度（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/mL）和不同脅迫時(shí)間（12、24、36h）下，NNK對(duì)細(xì)胞的脅迫作用，主要以細(xì)胞及其細(xì)胞核形態(tài)的變化，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的變化，并以相關(guān)基因（GCLC、Nrf2、Bax、Bcl-2）在NNK誘導(dǎo)下所產(chǎn)生的調(diào)控變化為檢測(cè)指標(biāo)，其結(jié)果如下：
　　1、NNK能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變。對(duì)照組細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，排列均勻，大小基本一致，輪廓清晰，懸浮細(xì)胞少。在實(shí)驗(yàn)組中，隨N

3、NK濃度上升，細(xì)胞出現(xiàn)皺縮，細(xì)胞數(shù)量及生長(zhǎng)密度逐漸減少，細(xì)胞顆粒增多。
　　2、MTT結(jié)果顯示：相同脅迫時(shí)間下，NNK對(duì)兩種細(xì)胞增殖的抑制均隨NNK濃度的增加而升高，與陰性對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），存在明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。
　　3、Hochest33258染色結(jié)果顯示：NNK脅迫細(xì)胞24h后，與正常細(xì)胞相比，細(xì)胞核均出現(xiàn)不同程度藍(lán)色熒光，可見(jiàn)核致密、濃染等典型的凋亡形態(tài)學(xué)特征。
　　4、流式細(xì)胞

4、儀檢測(cè)結(jié)果顯示：細(xì)胞凋亡率隨 NNK濃度的升高而增大；且能將細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期。
　　5、熒光定量PCR結(jié)果顯示：經(jīng)NNK脅迫后，兩種細(xì)胞中GCLC、Nrf2、Bax表達(dá)均上調(diào)，Bcl-2表達(dá)明顯下調(diào)；其表達(dá)變化與這些基因的作用機(jī)理相一致。
　　由以上結(jié)果可得出：NNK能明顯抑制V79和NCTC1469細(xì)胞增殖，存在正向的劑量-效應(yīng)關(guān)系；NNK對(duì)V79和NCTC1469有促凋亡作用；NNK可使V79和NCTC1469