根皮苷酶法轉(zhuǎn)化制備功能性黃色素研究.pdf

1、色素是我們?nèi)粘Ｉ钪谐Ｒ姷囊环N食品添加劑，其安全性一直備受人們關(guān)注，人工合成色素不斷被曝光出安全性問題，使得安全、穩(wěn)定的天然色素越來越受到人們的重視。本文主要通過采用體外轉(zhuǎn)化法模擬蘋果汁中黃色素的形成過程，研究建立了根皮苷酶促轉(zhuǎn)化制備功能性黃色素的最適技術(shù)方法，研制出安全、穩(wěn)定的功能性蘋果黃色素粗品，通過體外抗氧化活性及穩(wěn)定性研究明確其部分功能特性及應(yīng)用范圍，并對固定化酶法轉(zhuǎn)化制備功能性黃色素進(jìn)行初探。
　?。?）建立了一種快速檢

2、測該酶促反應(yīng)產(chǎn)物的檢測方法，色譜條件為色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1×100mm，Φ1.7μm）；流動相：甲醇和pH2.6的磷酸水溶液（40∶60），等度洗脫；柱溫：30℃；流速：0.3mL·min-1；檢測器：紫外檢測器；波長：287nm。該方法能夠在5min內(nèi)實(shí)現(xiàn)酶促反應(yīng)產(chǎn)物的分離，得到酶促反應(yīng)產(chǎn)物色譜圖，在0.10-1.0mg/mL范圍內(nèi)線性良好，最低檢測限為0.0279mg/L，定量限為

3、0.1863mg/L，且精密度良好。加標(biāo)回收率為98.69％，RSD是1.39%，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
　?。?）以根皮苷為原料，采用多酚氧化酶進(jìn)行酶促轉(zhuǎn)化制備功能性黃色素，得到反應(yīng)最適溫度為35℃，最適pH為6.5，反應(yīng)進(jìn)程研究表明根皮苷的轉(zhuǎn)化在反應(yīng)進(jìn)行到90min時(shí)的轉(zhuǎn)化率基本達(dá)到最大。酶反應(yīng)動力學(xué)研究表明，在實(shí)驗(yàn)條件下，底物飽和的濃度為1mg/mL，動力學(xué)方程為：
　　此處公式省略
　　（3）根皮苷酶促反應(yīng)液經(jīng)乙酸

4、乙酯4-5次萃取后可將未反應(yīng)完全的根皮苷完全去除，得率為42.69%，經(jīng)過甲醇溶解黃色素樣品去除緩沖鹽的得率為86.85%。
　?。?）根皮苷及其酶促轉(zhuǎn)化產(chǎn)物黃色素的抗氧化活性存在一定的差異，其中純化后的黃色素對DPPH自由基的清除力顯著強(qiáng)于根皮苷和純化前的黃色素樣品，但弱于抗壞血酸，對Fe3+的還原能力也強(qiáng)于根皮苷和純化前黃色素樣品，這兩種方法得到的結(jié)果一致。黃色素為強(qiáng)極性水溶色素，在酸性和中性條件下較穩(wěn)定，長時(shí)間高溫和日照對蘋