左旋、右旋及外消旋蝦青素抗脂質(zhì)過(guò)氧化活性差異的研究.pdf

1、蝦青素（Astaxanthin)是一種抗氧化活性極強(qiáng)的類(lèi)胡蘿卜素，具有多種生物學(xué)功能。由于蝦青素獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)，存在很多同分異構(gòu)體。其中不同酯化程度和不同幾何構(gòu)型蝦青素的抗氧化活性差異已有大量研究，不同立體構(gòu)型蝦青素的抗氧化活性研究尚未深入。前期的體外化學(xué)模型和體內(nèi)秀麗線蟲(chóng)模型研究，表明不同立體構(gòu)型蝦青素抗氧化活性存在差異，但還需要更多的模型進(jìn)行驗(yàn)證和更深入的研究。本研究利用亞油酸模型、大鼠肝線粒體和紅細(xì)胞模型進(jìn)行多方面深入探討左旋、右

2、旋和和混合型蝦青素的抗脂質(zhì)過(guò)氧化活性。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下：
　　(1)不同立體構(gòu)型蝦青素的制備、純度檢測(cè)以及立體構(gòu)型的鑒定。分別采用勻漿研磨技術(shù)和超聲波萃取技術(shù)從雨生紅球藻和紅法夫酵母中提取蝦青素，利用皂化、柱層析、薄層層析、重結(jié)晶、真空濃縮、冷凍干燥等方法，制備出純度為95％左右的左旋和右旋蝦青素單體。通過(guò)CHIRALPAK? IC手性固定化纖維柱的高效液相色譜（HPLC）分析，雨生紅球藻、紅法夫酵母提取的蝦青素以及人工合成

3、蝦青素分別以左旋（3S,3′S）、右旋（3R,3′R）和混合型（3S,3′S:3S,3′R:3R,3′R≈1:2:1）形式存在。
　　(2)利用亞油酸模型研究了三種立體構(gòu)型蝦青素抗脂質(zhì)過(guò)氧化活性差異。采用硫氰酸鐵法和硫代巴比妥酸法研究亞油酸體系脂質(zhì)過(guò)氧化程度，結(jié)果表明三種立體構(gòu)型蝦青素均能明顯延緩亞油酸的自動(dòng)氧化，且能顯著降低Fe2+作用下亞油酸氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）的含量。左旋、右旋和混合型蝦青素對(duì)亞油酸自動(dòng)氧化的IC50值分

4、為142.02μM、138.51μM和208.17μM，對(duì)Fe2+作用下亞油酸氧化產(chǎn)物MDA的IC50分別為33.22μM、34.96μM、39.76μM。左旋和右旋蝦青素在這兩方面的抑制作用無(wú)顯著性差異（p>0.05），但均顯著強(qiáng)于混合型蝦青素（p<0.05）。
　　(3)三種立體構(gòu)型蝦青素對(duì) AAPH作用下大鼠肝線粒體脂質(zhì)過(guò)氧化的影響。在AAPH氧化應(yīng)激條件下，大鼠肝線粒體的腫脹程度隨時(shí)間增加而增加，氧化產(chǎn)物MDA、蛋白質(zhì)羰基

5、含量顯著升高，同時(shí)超氧化物歧化酶（SOD）、Na+K+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase、谷胱甘肽過(guò)氧物酶（GSH-Px）活力顯著下降，說(shuō)明線粒體損傷模型構(gòu)建成功。40μM左旋、右旋和混合型蝦青素預(yù)處理后，對(duì)線粒體腫脹的抑制率分別為74.55%、62.93%、58.08%，因此其抑制能力順序?yàn)樽笮?右旋>混合型；左旋、右旋和混合型蝦青素預(yù)處理后，對(duì)MDA的IC50值分別為30.16μM、34.43μM、36.75μM，其中左

6、旋蝦青素的抑制作用顯著強(qiáng)于混合型（p<0.05），右旋與左旋和混合型均無(wú)顯著差異（p>0.05）；左旋、右旋和混合型蝦青素預(yù)處理后，對(duì)蛋白質(zhì)羰基的IC50值分別為27.29μM、26.36μM、34.69μM，左旋和右旋的抑制作用無(wú)顯著性差異（P>0.05），但均顯著強(qiáng)于混合型蝦青素（p<0.05），；三種立體構(gòu)型蝦青素預(yù)處理后均能明顯提高 AAPH作用下肝線粒體的各種酶活力（SOD、Na+K+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPa

7、se和GSH-Px），不同立體構(gòu)型之間均無(wú)顯著性差異（p>0.05）。
　　(4)三種立體構(gòu)型蝦青素預(yù)處理對(duì)H2O2作用下紅細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化的影響。在H2O2氧化應(yīng)激條件下，紅細(xì)胞溶血率顯著增加，紅細(xì)胞膜上氧化產(chǎn)物MDA、NO生成量也明顯增多，谷胱甘肽（GSH）含量和 SOD酶活力顯著下降。不同立體構(gòu)型蝦青素預(yù)處理后，均能顯著抑制紅細(xì)胞溶血，其中左旋和右旋蝦青素的抑制能力無(wú)顯著性差異（p>0.05），但均顯著高于混合型（p<0.05