兩面針藥材抑菌“譜-效”的關系研究.pdf

1、我國中藥歷史悠久，功效顯著，我國現(xiàn)行中藥質量評價的通用模式是將已知的主要成分作為指標予以檢測。這種模式只考慮了中藥所含眾多復雜成分中的個別成分，忽略了諸多成分間的協(xié)同作用和拮抗作用，因而難以客觀有效地評價中藥的內在質量，還使中藥的摻偽造假有機可乘。于是，中藥指紋圖譜作為一種能較全面反映中藥所含化學物質存在狀態(tài)的質量評價模式應運而生，目前已成為國際公認的控制中藥或天然藥物質量的最有效手段，是能夠為國內外廣泛接受的一種中藥質量評價模式。但當

2、前中藥指紋圖譜技術所展示的還只是其中化學成分群的存在狀態(tài)而已，尚不能闡述其與中藥功效的相關性。要真正實現(xiàn)客觀有效地評價中藥質量，除對其中的化學成分用指紋圖譜技術予以表達外，還須進一步開展指紋圖譜與藥效相關性的研究，從而建立一種能夠通過測定中藥色譜指紋圖譜而預測其藥效的質量評價新模式，即“譜-效”相關模式。
　　 目的：
　　 以蕓香科植物兩面針Zanthoxylumnitidum(Roxb.)DC.為研究對象，構建兩面針

3、藥材的化學指紋圖譜。以金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌、傷寒沙門氏菌、肺炎克雷伯氏菌5種細菌為藥效模型，進行藥效學試驗，獲得兩面針藥材化學指紋圖譜的量化特征和藥效學數(shù)據。在此基礎上，采用后退逐步回歸統(tǒng)計學分析方法，尋找兩面針藥材“化學譜”—“藥效”之間的對應關系。
　　 方法：
　　 1.兩面針藥材抑菌活性部位和提取工藝的篩選分別采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水4種溶劑對兩面針藥材進行提取，得到不同極性溶劑的提取

4、物；有效部位即氯仿部位采用索氏提取法、超聲提取法、回流提取法等工藝進行提取，得到不同工藝的提取物。采用微量稀釋法，以金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌、傷寒沙門氏菌、肺炎克雷伯氏菌5種細菌為模型，對不同極性部位和不同工藝的提取物進行活性篩選，確定兩面針藥材的抑菌活性部位和提取工藝。并用紙片瓊脂擴散法對43個兩面針藥材樣品進行抑菌活性的測定，得到各樣品對5種細菌的抑菌圈。
　　 2.建立兩面針藥材HPLC化學指紋圖譜通過優(yōu)

5、化液相色譜條件，根據化學指紋圖譜研究的要求，運用國家藥典委員會頒布的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件，建立并評價兩面針藥材抑菌活性部位的HPLC指紋圖譜。
　　 3.構建兩面針藥材“譜-效”關系模型采用后退逐步回歸統(tǒng)計學分析方法，將兩面針藥材HPLC指紋圖譜的峰面積進行量化，與紙片瓊脂擴散法測得的兩面針藥材抑菌活性結果結合，構建兩面針藥材抑菌“化學譜”—“藥效”關系。
　　 結果：
　　 1.氯仿提取部位為兩面

6、針藥材抑菌作用較好的活性部位，該部位含有氯化兩面針堿等生物堿類成分。樣品溶液制備工藝為氯仿直接回流法。樣品的抑菌活性由高到低排列為：廣西扶綏縣2＞廣西大新碩龍＞廣西那坡縣＞廣西欽州那麗鎮(zhèn)＞對照藥材1＞廣西崇左。
　　 2.建立的兩面針藥材HPLC指紋圖譜相似度大多數(shù)達到0.9左右，其中的24個指紋峰包括氯化兩面針堿、白屈菜紅堿等成分。所建立的HPLC指紋圖譜也能很好的區(qū)分兩面針藥材與其非藥用部位、偽品等，這有利于進一步規(guī)范兩面針

7、藥材的質量標準。
　　 3.后退逐步回歸法表明：兩面針藥材HPLC指紋圖譜中的24個指紋峰中，有17個峰對金黃色葡萄球菌有作用，金黃色葡萄球菌的“譜—效”關系式為：Y=11.562-9.542X1+3.149X3-3.720X4+7.903X5-3.265X7-1.422X8+1.929X10+1.919X11-1.614X12-1.143X13-3.969X14-1.438X15-3.036X16+3.412X20+5.826

8、X21+1.882X22+3.836X24(R2=0.921)；有17個峰對大腸埃希氏菌作用，大腸埃希氏菌“譜—效”關系式為：Y=11.074-5.969X1+2.102X2+2.809X3+2.051X4+3.522X5-1.638X6-0.840X7-0.789X8-0.844X10+1.070X11-0.575X13-1.150X15-2.031X16-1.795X18+1.302X21-0.576X23+3.952X24(R2=

9、0.914)；有13個峰對枯草芽孢桿菌有作用，枯草芽孢桿菌的“譜-效”關系式為：Y=12.397-8.362X1+2.211X3-2.200X4+2.656X5-2.516X8+1.421X9+1.347X11-2.552X16+2.946X18+1.366X19+2.311X20+3.835X21+3.119X24(R2=0.908)；有13個峰對傷寒沙門氏菌有作用，傷寒沙門氏菌的“譜-效”關系式為：Y=7.505-4.742X1-2

10、.478X4+2.999X5+1.969X6+1.958X11-1.170X12-1.108X13-1.273X15+4.023X19+1.740X20+2.953X21+1.902X22+0.412X23(R2=0.936)；有17個峰對肺炎克雷伯氏菌有作用，肺炎克雷伯氏菌的“譜—效”關系式為：Y=11.103-8.016X1+1.177X3-1.717X4+3.849X5-1.183X7-1.355X8+1.525X10+1.206

11、X11-1.217X12-0.623X13-1.435X14-1.612X16+1.556X19+2.235X20+4.794X21+1.162X22+2.910X24(R2=0.919)。10個兩面針藥材樣品的驗證結果表明所得的“譜—效”關系式計算值與實際值十分接近。
　　 結論：
　　 1.不同產地、不同來源的兩面針藥材，其化學成分的不同，直接影響到了藥效的差異。因此，傳統(tǒng)的以單一或某幾個化學成分對兩面針藥材的質量進