兩面針抗宮頸癌、肝癌譜-效關(guān)系研究.pdf

1、中藥的療效是其所含多種成分協(xié)同、互補(bǔ)或制約的綜合作用的結(jié)果，而目前對(duì)中藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)，僅以一種或幾種化學(xué)成分的定性或定量測定作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，顯然不能達(dá)到控制中藥質(zhì)量的目的。中藥指紋圖譜是中國國家藥品監(jiān)督管理局(SFDA)進(jìn)行中藥材鑒定和成藥質(zhì)量控制的推薦技術(shù)之一，自2000年國家藥品監(jiān)督管理局頒布《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》以來，中藥指紋圖譜的研究已成為我國中藥研究和產(chǎn)業(yè)界的熱點(diǎn)。而目前的指紋圖譜僅僅局限在“化學(xué)成分群”的分

2、析，沒有以藥效作為指紋性的依據(jù)，所得的圖譜并不能如實(shí)體現(xiàn)中藥的質(zhì)量和療效。如何將中藥指紋圖譜中化學(xué)成分的變化和中藥藥效結(jié)果聯(lián)系起來，研究他們的相關(guān)關(guān)系，建立與中藥藥效基本一致的，能反映中藥內(nèi)在質(zhì)量的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系，這正是本論文要研究和解決的問題。
　　 本論文以蕓香科植物兩面針Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.為研究對(duì)象，以HeLa、HepG-2兩種腫瘤細(xì)胞為藥效模型，構(gòu)建兩面針的指紋圖譜。在獲得抗腫瘤活性

3、測定的結(jié)果和建立化學(xué)成分指紋圖譜的基礎(chǔ)上，采用多元線性回歸法，尋找兩面針“化學(xué)譜”-“藥效”之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系。本論文的研究包括：
　　 方法：(1)兩面針抗腫瘤活性部位的篩選采用回流法，分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水等4種溶劑對(duì)兩面針?biāo)幉倪M(jìn)行提取，得到不同溶劑部位提取物；采用MTT法，以人宮頸癌細(xì)胞株HeLa和人肝癌細(xì)胞HepG-2為模型，對(duì)不同溶劑部位提取物進(jìn)行活性成分篩選；進(jìn)行HPLC考察，觀察不同部位成分、含量的差異；根據(jù)

4、MTT法和HPLC圖譜確定兩面針?biāo)幉闹锌鼓[瘤的活性部位，制備43個(gè)產(chǎn)地的兩面針提取物。(2)建立兩面針HPLC化學(xué)指紋圖譜根據(jù)化學(xué)指紋圖譜研究的要求，運(yùn)用國家藥典委員會(huì)頒布的中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件，建立并評(píng)價(jià)兩面針抗腫瘤活性部位的HPLC指紋圖譜。(3)各產(chǎn)地兩面針抗腫瘤活性測定采用MTT法，以人宮頸癌細(xì)胞株HeLa和人肝癌細(xì)胞HepG-2為模型，對(duì)43個(gè)產(chǎn)地的兩面針提取物進(jìn)行抗腫瘤活性測定。(4)構(gòu)建兩面針譜-效關(guān)系模型采

5、用多元線性回歸法，將量化特征峰面積與MTT法測得兩面針?biāo)幉目鼓[瘤活性的結(jié)果結(jié)合，構(gòu)建兩面針抗腫瘤“化學(xué)譜”-“藥效”關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 (1)氯仿提取部位為兩面針?biāo)幉目鼓[瘤的活性部位，該部位含有氯化兩面針堿、鵝掌楸堿、白屈菜紅堿、乙氧基白屈菜紅堿等具有抗腫瘤作用的生物堿類成分。
　　 (2)建立的兩面針?biāo)幉腍PLC指紋圖譜相似度達(dá)到0.7，經(jīng)相似度軟件篩選出24個(gè)指紋峰，包括已知具有抗腫瘤活性的氯化兩面針

6、堿、乙氧基白屈菜紅堿、左旋芝麻素等成分。
　　 (3)各產(chǎn)地兩面針的抗腫瘤活性存在差異，抗腫瘤作用較強(qiáng)的產(chǎn)地為廣西那坡縣、大塘鎮(zhèn)、廣西大新縣、廣西融水縣、廣西扶綏縣。說明這幾個(gè)產(chǎn)地兩面針?biāo)幉牡目箤m頸癌、肝癌效果比較好，品質(zhì)比較高。
　　 (4)經(jīng)直線回歸處理，HPLC指紋圖譜中的24個(gè)指紋峰中，有17個(gè)峰對(duì)HeLa細(xì)胞有作用，HeLa的譜-效關(guān)系式為：Y=28.071+18.451X1-13.693X2-4.670X4+

7、9.028X6+6.292X7-1.817X8-3.428X11+10.852X14-5.395X15+6.936X17+9.263X18+8.904X19+4.567X20-9.226X21-8.954X22+3.619X23-5.357X24(R2＝0.957)；有17個(gè)峰對(duì)HepG-2細(xì)胞有作用，HepG-2的譜-效關(guān)系式為：Y=70.255-16.695X1-2.756X3+11.519X5+3.107X6-4.491X7-1.

8、737X8-1.052X9+13.224X10-11.944X11-9.035X12-25.106X15+9.911X16+10.796X17+10.489X18+3.432X20-12.643X21+6.152X23(R2=0.977)。經(jīng)10批藥材驗(yàn)證，譜-效關(guān)系式計(jì)算值與實(shí)際值的偏差率不超過10％，表明譜-效關(guān)系可用于預(yù)測兩面針的抗宮頸癌、肝癌作用。結(jié)論：
　　 (1)不同產(chǎn)地的兩面針?biāo)幉闹械幕瘜W(xué)成分的含量存在差異，直接導(dǎo)