昆明山海棠有效成分提取方法優(yōu)化和HPLC指紋圖譜的研究.pdf

1、實驗目的：
　　 昆明山海棠[Tripterygium Hypoglaucum(Levl.)Hutch，THH]為衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，是一種民間傳統(tǒng)中藥，具有消炎、解毒、祛風濕等作用。臨床用于類風濕性關節(jié)炎、慢性。腎炎和各種皮膚病。昆明山海棠具有良好的藥理作用，國內(nèi)外學者對其生藥學、化學成分、藥理作用、臨床應用等方面進行了較多的研究和報道。該中藥片劑收載于2005年版《中華人民共和國藥典》。昆明山海棠制劑雖然應用多年，但總體說仍

2、然缺少有效質(zhì)量控制手段；加之產(chǎn)地的不同，其有效成分含量差異較大，為了進一步研究并完善其質(zhì)量控制技術(shù)方法，本文以昆明山海棠中有效成分雷公藤甲素為指標，對昆明山海棠藥材有效成分的提取方法和含量測定進行了研究，并對11個不同產(chǎn)地昆明山海棠藥材中雷公藤甲素含量進行了分析，同時對不同產(chǎn)地昆明山海棠高效液相指紋圖譜進行了分析。
　　 內(nèi)容及方法：
　　 1.應用RP-HPLC法，建立了雷公藤甲素標準品的測定方法；
　　 2.

3、以熱提取法為基礎，以雷公藤甲素為標準，采用單因素試驗和正交試驗對昆明山海棠中的主要有效成分提取方法進行了優(yōu)化；
　　 3.應用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定了不同產(chǎn)地昆明山海棠中雷公藤甲素的含量；
　　 4.分析了不同產(chǎn)地的昆明山海棠藥材高效液相指紋圖譜，利用中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件分析了昆明山海棠特征指紋圖譜及不同產(chǎn)地昆明山海棠的差異。
　　 實驗結(jié)果：
　　 1.建立了昆明山海棠中有效

4、成分雷公藤甲素的測定方法，并以雷公藤甲素為標志，對THH的提取方法進行了優(yōu)化，通過單因素實驗和正交試驗，確定其最佳提取條件為：乙酸乙酯作為提取溶劑，熱提取時間5h，溫度75℃，固液比為1:10。
　　 2.對云南不同產(chǎn)地的11個昆明山海棠藥材樣品中的雷公藤甲素的含量進行了測定，結(jié)果表明不同產(chǎn)地THH根部雷公藤甲素的含量差異較大，玉溪元江縣和昆明祿勸縣產(chǎn)THH根部雷公藤甲素的含量較高，而昆明尋甸縣、曲靖馬龍縣產(chǎn)THH根部雷公藤甲素

5、含量較低，相差達4倍左右。這說明測定THH中有效成分作為其藥材質(zhì)量的標志具有重要意義，也為制訂科學的昆明山海棠制劑質(zhì)量控制標準提供了數(shù)據(jù)。
　　 3.建立了昆明山海棠藥材高效液相指紋圖譜方法：甲醇為提取溶劑，回流提取，過濾后直接進樣；采用甲醇-乙腈-水梯度洗脫；檢測波長210nm。通過對方法學穩(wěn)定性、重復性和精確度分析，均表明相關條件適宜于昆明山海棠藥材高效液相指紋圖譜的分析。
　　 4.初步建立了11個不同產(chǎn)地昆明山海

6、棠藥材指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)有10個峰是共有的，確定為共有特征峰；10個共有特征峰峰面積總和大于90％，可以作為THH藥材鑒定的標志峰。通過對指紋圖譜中峰的位置、保留時間、峰面積、整體圖貌等特征對譜圖進行分析，發(fā)現(xiàn)9個產(chǎn)地的昆明山海棠藥材相似度達到0.9以上，但大理漾濞、大理賓川產(chǎn)的昆明山海棠藥材相似度僅為0.651、0.527，存在著較大差異；此外，不同產(chǎn)地各成分含量差異較大，提示其藥效、毒性等方面可能存在較大差異。相關指紋圖譜的研究數(shù)據(jù)，為

7、THH藥材鑒定、藥效的評估等質(zhì)量控制提供了數(shù)據(jù)。
　　 結(jié)論：
　　 1.建立了的雷公藤甲素RP-HPLC檢測方法，總體操作簡便、準確，靈敏度高，重復性好，可用于昆明山海棠片中雷公藤甲素的含量測定。
　　 2.優(yōu)化了THH有效成分提取實驗方法，以雷公藤甲素為標準，其最佳提取條件為：乙酸乙酯作為提取溶劑，熱提取時間5h，溫度75℃，固液比為1:10。
　　 3.測定了不同產(chǎn)地THH根部雷公藤甲素的含量，不同