脊髓圓錐損傷后膀胱感覺及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)支配重建的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分膀胱感覺及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)支配重建動(dòng)物模型的建立及鑒定
　　目的:建立并鑒定膀胱感覺及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)支配重建的SD大鼠動(dòng)物模型，為進(jìn)一步研究排尿中樞的重塑及機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法:45只雌性成年SD大鼠隨機(jī)分為神經(jīng)根切斷組（15只），神經(jīng)根吻合組（20只），和正常對(duì)照組（10只）。將神經(jīng)根切斷組大鼠，L4及以下雙側(cè)脊神經(jīng)前后根全部切斷;將神經(jīng)根吻合組大鼠，在脊神經(jīng)根切斷后，雙側(cè)L4脊神經(jīng)前、后根與S1相應(yīng)神經(jīng)根吻合;對(duì)照組行假手術(shù)處置。術(shù)后

2、6個(gè)月，取神經(jīng)根吻合組大鼠和正常對(duì)照組大鼠分別行神經(jīng)根電刺激、神經(jīng)吻合口甲苯胺藍(lán)染色、熒光金神經(jīng)示蹤染色和膀胱濕重測(cè)量等檢測(cè)，而神經(jīng)根吻合組大鼠僅進(jìn)行熒光金神經(jīng)示蹤染色和膀胱濕重的測(cè)量，對(duì)動(dòng)物模型進(jìn)行鑒定。結(jié)果:對(duì)吻合神經(jīng)根及正常S1神經(jīng)根的電刺激均可引起膀胱內(nèi)壓急劇升高并排出尿液。神經(jīng)吻合口的甲苯胺藍(lán)染色顯示，吻合神經(jīng)成功通過吻合口，通過率達(dá)到54％。熒光金神經(jīng)示蹤染色顯示，神經(jīng)根吻合組大鼠的L4脊髓雙側(cè)灰質(zhì)熒光金染色陽(yáng)性，而神經(jīng)根切

3、斷組和正常對(duì)照組未在相應(yīng)脊髓水平檢測(cè)到熒光金染色。神經(jīng)根切斷組大鼠膀胱濕重（1.804±0.612g）＞神經(jīng)根吻合組（0.502±0.166g）＞對(duì)照組(0.095±0.026g)，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。結(jié)論:成功建立了膀胱感覺和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)支配損傷及修復(fù)的動(dòng)物模型，為進(jìn)一步研究排尿中樞的重塑及機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
　　第二部分排尿反射重建大鼠的尿流動(dòng)力學(xué)及膀胱電生理研究
　　目的:探索經(jīng)神經(jīng)途徑重建排尿反射后，膀

4、胱尿流動(dòng)力學(xué)及電生理改變，為經(jīng)神經(jīng)途徑膀胱功能重建奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共30只，分為三組:A組為10只神經(jīng)根吻合術(shù)后6個(gè)月的雌性SD大鼠;B組為10只神經(jīng)根切斷術(shù)后6個(gè)月的雌性SD大鼠;C組為10只正常雌性SD大鼠。取各組大鼠分別行膀胱壓力容積曲線檢測(cè)，計(jì)算最大膀胱容量、最大排尿壓、最大膀胱容量、膀胱順應(yīng)性、平均尿流率;行膀胱灌注，檢測(cè)吻合神經(jīng)根及正常膀胱支配神經(jīng)的誘發(fā)電位、逼尿肌電圖及尿道括約肌電圖;行膀胱電刺激，測(cè)量膀胱內(nèi)壓

5、改變。結(jié)果:膀胱最大容量和殘余尿量的檢測(cè)結(jié)果均為:B組＞A組＞C組，(P＜0.05);最大排尿壓檢測(cè)結(jié)果為:A組與C組均＞B組，(P＜0.05)，而A組與C組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);膀胱順應(yīng)性檢測(cè)結(jié)果為:B組＞A組＞C組，(P＜0.05);膀胱逼尿肌靜息態(tài)及誘發(fā)態(tài)電位檢測(cè)結(jié)果均為:B組＞A組＞C組，(P＜0.05);尿道括約肌靜息態(tài)檢測(cè)結(jié)果均為:C組＞A組＞B組，(P＜0.05);尿道括約肌誘發(fā)態(tài)檢測(cè)結(jié)果均為:A組＞C組＞B

6、組，(P＜0.05);神經(jīng)根誘發(fā)電位檢測(cè)結(jié)果為:C組＞A組;膀胱逼尿肌電刺激檢測(cè)結(jié)果為:A組和C組膀胱內(nèi)壓升高，而B組膀胱內(nèi)壓無明顯變化。結(jié)論:膀胱感覺及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)支配重建后，膀胱部分恢復(fù)了排尿功能，但一些指標(biāo)仍低于正常水平。
　　第三部分排尿反射重建大鼠膀胱及脊髓病理變化的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:探索經(jīng)神經(jīng)途徑重建排尿反射后，膀胱及脊髓組織結(jié)構(gòu)病理變化的本質(zhì)及規(guī)律，為經(jīng)神經(jīng)途徑膀胱功能重建奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共70只，分

7、為7組，每組10只:A1組為神經(jīng)根吻合1周組，A2組為神經(jīng)根吻合4周組，A3組為神經(jīng)根吻合6個(gè)月組，B1組為神經(jīng)根切斷1周組，B2組為神經(jīng)根切斷4周組，B3組為神經(jīng)根切斷6個(gè)月組，C組為正常雌性成年SD大鼠。各組大鼠于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取材脊髓及膀胱。膀胱標(biāo)本行HE染色、VG染色，及VEGF、PCNA、sma、免疫組化和westernblot檢測(cè)。脊髓取材后行HE染色、尼氏染色、TUNEL染色。結(jié)果:膀胱HE染色可見A1組、B1組呈急性炎癥表現(xiàn)

8、;A2組、B2組呈慢性炎癥表現(xiàn);B3組呈萎縮表現(xiàn);A3無炎癥表現(xiàn)但膀胱壁增厚;C組結(jié)構(gòu)正常無炎癥及增生表現(xiàn)。膀胱VG染色計(jì)算膠原纖維比例為:B3組＞A2、B2組＞A3組＞A1、B1、C組(P＜0.05)，而A2組與B2組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，A1、B1、C組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。PCNA免疫組化檢測(cè)結(jié)果為:A2、B2組＞A1、B1組＞A3、C組＞B3組(P＜0.05)，而A2、B2組間，A1、B1組間及A3、C組間無統(tǒng)

9、計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。VEGF免疫組化檢測(cè)結(jié)果為:A1、B1組＞A2、B2組＞B3組＞A3、C組(P＜0.05)，而A1、B1組間、A2、B2組間及A3與C組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。脊髓HE染色可見A1、A2、B1、B2、B3組呈現(xiàn)炎癥反應(yīng)，而A3組及C組無炎癥反應(yīng)。脊髓尼氏染色計(jì)算細(xì)胞數(shù)量為:A2、B2組＞A1、B1組＞A3、C組＞B3組(P＜0.05)，而A1、A2組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，A3與C組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差

10、異。TUNEL染色計(jì)算神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)為:B3組＞A2、B2組＞A1、B1組＞A3組＞C組。結(jié)論:排尿反射弧中斷后膀胱及相應(yīng)的脊髓階段發(fā)生壞死、炎癥、萎縮、凋亡等變化，神經(jīng)支配重建可部分逆轉(zhuǎn)膀胱及脊髓的病理變化。
　　第四部分排尿反射重建大鼠脊髓排尿中樞改變的功能磁共振研究
　　目的:探究膀胱神經(jīng)支配重建后，脊髓排尿中樞位置及活性的改變，為排尿中樞重塑及機(jī)制的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共30只，分為三組:A組為10只神

11、經(jīng)根吻合術(shù)后6個(gè)月雌性SD大鼠;B組為10只神經(jīng)根切斷術(shù)后6個(gè)月的雌性SD大鼠;C組為10只正常雌性SD大鼠。各組動(dòng)物于膀胱空虛狀態(tài)及經(jīng)尿道灌注溫生理鹽水后，采用BRUKER7T磁共振系統(tǒng)運(yùn)用T2*-EPI掃描序列行腰、骶髓功能磁共振成像(fMRI)，行BOLD圖像分析，對(duì)激活區(qū)的信號(hào)強(qiáng)度變化進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:30只大鼠均獲得了清晰的脊髓解剖圖像和功能圖像。膀胱空虛狀態(tài)下及充盈狀態(tài)下功能圖像經(jīng)GE Advanced W orksta