正品丹參及山東丹參不同地理居群的DNA分子標記的開發(fā)及鑒定.pdf

1、丹參是唇形科鼠尾草屬植物Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根及根莖，在中藥體系中占有重要地位。隨著丹參需求量的大幅度增加以及野生資源的逐漸減少，栽培品已成為丹參藥材的主要來源。甘西鼠尾草、滇丹參、擬丹參和毛地黃鼠尾草等由于和丹參外觀的相似性，經(jīng)常被誤認為丹參。盡管分子標記在鼠尾草屬的鑒別中早已有所應(yīng)用，但是丹參與其混淆品間仍需建立一種快速有效的鑒定方法。另外，雖有研究表明山東產(chǎn)丹參均為優(yōu)質(zhì)丹參，但省內(nèi)不同產(chǎn)區(qū)、不同丹參

2、種質(zhì)間的藥用成分含量差別很大。由于丹參的變種或變型在藥材性狀上的差別不大，缺乏有效的鑒定方法，因此各產(chǎn)區(qū)向來混同收購，嚴重影響了山東丹參藥材產(chǎn)量和質(zhì)量的穩(wěn)定性，并成為丹參規(guī)范化栽培及優(yōu)良品種選育和推廣的瓶頸。
　　本研究以正品丹參、4種丹參混淆品、及山東丹參的4個居群及煙臺航天丹參品種為材料，利用核DNA的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)及Major latex-like protein（MLP）基因序列為目標，分別挖掘了正品丹參、山東萊蕪丹參居群和

3、煙臺航天丹參的特異SNP分子標記，并利用等位基因特異PCR進行了鑒定，實驗結(jié)果如下：
　　1．核DNA的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列對丹參、甘西鼠尾草、滇丹參、擬丹參和毛地黃鼠尾草這五種鼠尾草屬物種分析，發(fā)現(xiàn)了其核內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)具有豐富的DNA多態(tài)性和大量的單核苷酸位點。利用等位基因特異性引物（SMR、SSR和SYR）建立的多重PCR體系能夠在一個反應(yīng)中同時鑒定4種鼠尾草屬物種。
　　2．利用MLP內(nèi)含子基因序列對山東省內(nèi)不同地理居群丹參

4、分析，發(fā)現(xiàn)不同居群中存在大量的單核苷酸多態(tài)性位點及缺失插入序列。其中萊蕪產(chǎn)丹參在562 bp上存在SNP特異性位點。針對此位點，設(shè)計了位點特異性引物L(fēng)WF，并利用多重特異性PCR成功鑒定出萊蕪產(chǎn)丹參。
　　3．煙臺航天丹參在MLP內(nèi)含子區(qū)域存在一段特異性的插入，依此設(shè)計航天搭載丹參的特異性引物ASF、ASR，利用這對引物可成功將煙臺航天丹參從山東省內(nèi)其他居群丹參分辨出來。
　　因此，丹參與其丹參摻雜品這種鑒定的方法不僅簡單可