乳凝集素通過ERK、p38MAPK通路調(diào)節(jié)未成熟樹突狀細(xì)胞吞噬及分泌IL-12、IL-10功能的研究.pdf

1、目的：
　　探討乳凝集素通過MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對臍帶血單核細(xì)胞來源的未成熟樹突狀細(xì)胞（im D C s)吞噬及分泌細(xì)胞因子IL-12、IL-10功能的影響。為今后Lactadherin的進(jìn)一步功能和機(jī)制研究提供新的思路，臨床開發(fā)和應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　擠帶血中分離得到單核細(xì)胞，分離當(dāng)天加入rhGM-CSF(50 ng/mL)和rhIL-4(10 ng/mL)，并按照不同組合加入乳凝集素（10 ng/mL

2、)和阻滯劑，誘導(dǎo)分化成未成熟樹突狀細(xì)胞。具體分組如下：①對照組；②乳凝集素組；③ERK通路阻滯組；④ERK通路阻滯劑+乳凝集素組；⑤p38MAPK通路阻滯組；⑥p38MAPK通路阻滯劑+乳凝集素組；⑦JN K通路阻滯組；⑧JN K通路阻滯劑+乳凝集素組。Westem b lo t法檢測 ERK、JNK、p38MAPK蛋白磷酸化程度；Real-time P C R法檢測MAPK信號通路下游轉(zhuǎn)錄因子c-fos、c-jun mRNA表達(dá)量；流

3、式細(xì)胞分析術(shù)檢測未成熟樹突狀細(xì)胞的吞噬功能；ELISA法檢測未成熟樹突狀細(xì)胞IL-12和 IL-10的分泌情況。采用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件對所得資料進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（M ean± SD)表示，結(jié)果分析組間差異比較采用t檢驗(yàn)。^<005表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　(1)乳凝集素處理后，乳凝集素組較對照組ERK蛋白磷酸化水平升高，p38MAPK蛋白磷酸化水平降低，JN K蛋白的磷酸化水平無明顯變

4、化； ERK、p38MAPK、JN K阻滯劑分別能使ERK、p38 MAPK、JN K的磷酸化水平明顯降低；乳凝集素處理后，MAPK通路下游核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子c-fos、c-jun m R N A表達(dá)量明顯升高(P<0.05)，ERK、p38 MAPK、JN K通路阻滯后，c-fos、c-jun mRNA表達(dá)量均明顯降低(P<0.05)。
　　(2)乳凝集素處理后，乳凝集素組較對照組，未成熟樹突狀細(xì)胞的吞噬能力明顯增強(qiáng)(P<0.05);

5、 E R K阻滯劑處理后，E R K通路阻滯劑+乳凝集素組較乳凝集素組，未成熟樹突狀細(xì)胞的吞噬能力明顯降低(P<0.05); p38MAPK阻滯劑處理后，p38 MAPK通路阻滯劑+乳凝集素組較乳凝集素組，未成熟樹突狀細(xì)胞的吞噬能力明顯增強(qiáng)(P<0.05);JN K阻滯劑處理后，JN K通路阻滯劑+乳凝集素組較乳凝集素組，未成熟樹突狀細(xì)胞的吞噬能力無明顯變化。
　　(3)乳凝集素處理后，乳凝集素組較對照組，未成熟樹突狀細(xì)胞IL-1

6、2、IL-10的分泌量明顯降低(P<0.05)，IL-12/IL-10的比值明顯升高(P<0.05); E R K阻滯劑處理后，E R K通路阻滯劑+乳凝集素組較乳凝集素組，未成熟樹突狀細(xì)胞IL-12、I L-10的分泌量明顯升高(P<0.05)，IL-12/IL-10的比值明顯降低(P<0.05); p38MAPK阻滯劑處理后，p38 M A P K通路阻滯劑+乳凝集素組較乳凝集素組，IL-12、IL-10的分泌量明顯降低(P<0.0

7、5)，IL-12/IL-10的比值明顯升高(P<0.05);JN K阻滯劑處理后，JN K通路阻滯劑+乳凝集素組較乳凝集素組，未成熟樹突狀細(xì)胞IL-12、I L-10的分泌無明顯變化，IL-12/IL-10的比值明顯降低(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　(1)乳凝集素能使ERK磷酸化水平明顯升高，p38 MAPK磷酸化水平明顯降低，且 M APK通路下游轉(zhuǎn)錄因子c-fos、c-jun mRNA表達(dá)量明顯增加，提示乳凝集素能