桂附地黃丸干預(yù)陽虛體質(zhì)的臨床觀察及血漿代謝組學(xué)機制研究.pdf

1、背景:
　　中醫(yī)體質(zhì)是指人體生命過程中，在先天稟賦和后天獲得的基礎(chǔ)上所形成的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理功能和心理狀態(tài)方面綜合的、相對穩(wěn)定的固有特質(zhì)。體質(zhì)決定著病證種類的傾向性，同時又是決定病性、病位、病程階段和病變趨勢的重要因素。陽虛體質(zhì)是指由于陽氣不足，失于溫煦，以畏寒怕冷，手足不溫，喜熱飲食，精神不振等虛寒表現(xiàn)為主要特征的體質(zhì)狀態(tài)。由于陽氣能衛(wèi)護肌表，防御外邪之入侵，具有氣化、溫煦的功能，陽氣不足則易患感冒、痰飲、水腫、痹證、泄瀉等證。近

2、年來，本課題組前期流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn):①隨著健康向亞健康、疾病的轉(zhuǎn)化，中醫(yī)偏頗體質(zhì)的比例逐漸增大;②健康和亞健康人群中陽虛體質(zhì)比例不小，位于偏頗體質(zhì)中的前三位?？梢?，陽虛體質(zhì)與健康狀態(tài)密切相關(guān)。因此，很有必要對陽虛體質(zhì)進行干預(yù)，對于及早調(diào)整體質(zhì)的偏頗狀態(tài)，預(yù)防疾病的發(fā)生有著重要的意義。
　　目前中醫(yī)體質(zhì)的機制研究多側(cè)重于基因多態(tài)性、基因差異表達等方面。然而中醫(yī)體質(zhì)是由先天遺傳因素與后天環(huán)境因素綜合作用而形成的，基因的差異并不能完全闡

3、明中醫(yī)體質(zhì)的分子機制。代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)后系統(tǒng)生物學(xué)的另一重要研究領(lǐng)域，它利用高通量、高效率、高靈敏度的現(xiàn)代分析手段，對代謝循環(huán)中的小分子代謝物（一般是指相對分子質(zhì)量小于1000的低分子化合物）的整體組成，進行動態(tài)跟蹤分析，借助多元統(tǒng)計分析方法，能夠即時、靈敏的反映基因、環(huán)境等內(nèi)外因素所引起的生物體功能狀態(tài)的改變，為臨床提供客觀的信息。體質(zhì)現(xiàn)象即是體內(nèi)陰陽、氣血、津液盛衰變化的反映狀態(tài)，具有相同體質(zhì)現(xiàn)象應(yīng)有著共同的物質(zhì)基礎(chǔ)

4、，這種生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)應(yīng)當(dāng)反映在基因、蛋白、細胞、組織臟器乃至整體等各個層次上，而代謝產(chǎn)物處于生命調(diào)控的末端。
　　體質(zhì)既具有一定的穩(wěn)定性又具有動態(tài)可變性，可通過干預(yù)調(diào)整其偏頗。體質(zhì)調(diào)理方法包括健康宣教、飲食調(diào)養(yǎng)、運動調(diào)養(yǎng)、情志調(diào)養(yǎng)、起居調(diào)養(yǎng)等生活方式干預(yù)和藥物干預(yù)方法。中醫(yī)方藥具有整體、雙向調(diào)節(jié)的特點，是干預(yù)體質(zhì)的重要手段。桂附地黃丸源自《金匱要略》腎氣丸，由肉桂、附子（制）、熟地黃、山茱萸（制）、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉八味

5、藥組成。方中澤瀉、茯苓利水滲濕，牡丹皮清瀉肝火，熟地黃味甘、性溫，養(yǎng)血滋陰、補精益髓，山茱萸補肝腎之陰，山藥滋補脾陰，肉桂味辛、甘，性大熱，補火助陽、益陽消陰，配附子溫散之力較強。全方配伍意在補中寓瀉，以使補而不膩，達到“陰中求陽”。桂附地黃丸具有溫補腎陽的功效，是調(diào)理陽虛體質(zhì)的常用方劑，但其藥理機制尚未完全闡明。
　　綜上所述，本研究擬納入健康和亞健康人群陽虛體質(zhì)，以排除疾病對體質(zhì)的影響，將陽虛體質(zhì)隨機分成兩組，對照組給予生活方

6、式指導(dǎo)，試驗組在生活方式指導(dǎo)的基礎(chǔ)上給予桂附地黃丸干預(yù)，評價研究對象的健康促進生活方式量表評分、中醫(yī)體質(zhì)量表評分和自測健康量表評分;對平和體質(zhì)、陽虛體質(zhì)的血漿利用核磁共振(NMR)技術(shù)方法進行代謝組學(xué)分析，找到陽虛體質(zhì)潛在的分子標(biāo)志物;對陽虛體質(zhì)干預(yù)前后血漿進行代謝組學(xué)分析，從代謝組學(xué)角度闡明桂附地黃丸干預(yù)陽虛體質(zhì)的療效機制，為中醫(yī)藥手段干預(yù)陽虛體質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。
　　目的:
　　1、以健康和亞健康人群陽虛體質(zhì)為切入點，明確

7、桂附地黃丸干預(yù)陽虛體質(zhì)的臨床療效。
　　2、從代謝組學(xué)角度闡明桂附地黃丸干預(yù)陽虛體質(zhì)的療效機制，為中醫(yī)藥手段干預(yù)陽虛體質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1、進行陽虛體質(zhì)中藥干預(yù)的臨床觀察研究。通過填寫本課題組研制的自測健康量表和常規(guī)體檢結(jié)果進行健康判斷，根據(jù)《中醫(yī)體質(zhì)分類與判定表》進行中醫(yī)體質(zhì)辨識，按照患者知情同意原則，共納入研究對象62例，并將其隨機分為對照組（31例）和試驗組（31例）。對照組給予健康促進生活方式指

8、導(dǎo)，包括自我實現(xiàn)、健康責(zé)任、運動和鍛煉、營養(yǎng)、人際關(guān)系和壓力管理方面。試驗組在生活方式指導(dǎo)的基礎(chǔ)上給予桂附地黃丸，連續(xù)服用28天。兩組干預(yù)后1個月、6個月、12個月各隨訪1次。采用健康促進生活方式量表評估兩組生活方式水平，采用中醫(yī)體質(zhì)量表評價體質(zhì)干預(yù)療效，采用自測健康量表評價健康狀態(tài)，實驗室相關(guān)檢查評價藥物安全性。應(yīng)用Epidata3.0軟件雙人獨立錄入建立數(shù)據(jù)庫。
　　2、進行平和體質(zhì)與陽虛體質(zhì)比較的代謝組學(xué)研究。從納入觀察的陽

9、虛體質(zhì)人群中對照組選擇10例，試驗組選擇10例。并納入平和體質(zhì)10例。試驗開始前1天抽血，清晨空腹，血液收集于肝素鈉溶液抗凝預(yù)處理后的離心管中，混勻，4℃，1000×g離心10min，吸取上層血漿，置-80℃冰箱保存。采用1H-NMR檢測方法，進行代謝組學(xué)分析。
　　3、進行生活方式干預(yù)陽虛體質(zhì)的代謝組學(xué)研究。納入陽虛體質(zhì)對照組10人，對生活方式干預(yù)前后血漿進行代謝組學(xué)分析。試驗開始前1天和干預(yù)1個月后抽血，清晨空腹，血液收集于肝

10、素鈉溶液抗凝預(yù)處理后的離心管中，混勻，4℃，1000×g離心10min，吸取上層血漿，置-80℃冰箱保存。采用1H-NMR檢測方法，進行代謝組學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　1、桂附地黃丸干預(yù)陽虛體質(zhì)的臨床觀察研究
　　對照組1例干預(yù)后12個月失訪，試驗組1例干預(yù)后1個月因去外地實習(xí)退出。其余所有入組對象均完成臨床試驗及隨訪。對照組和試驗組年齡、性別比、BMI差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05），具有可比性。兩組樣本具有均衡性，

11、對照組和試驗組具有可比性。
　　健康促進生活方式量表評分
　　重復(fù)測量方差分析結(jié)果顯示，健康促進生活方式量表各維度評分及健康促進生活方式總分對照組和試驗組組間差異無顯著性（P＞0.05）。干預(yù)后1個月、6個月，試驗組自我實現(xiàn)評分與干預(yù)前相比顯著上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。干預(yù)后12個月，對照組運動和鍛煉評分較干預(yù)前顯著上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.028)。干預(yù)后1個月、12個月，試驗組運動和鍛煉評分與干預(yù)前相

12、比顯著上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。干預(yù)后1個月、6個月、12個月，對照組和試驗組營養(yǎng)評分均較干預(yù)前顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。干預(yù)后1個月、6個月、12個月，試驗組壓力管理均較干預(yù)前顯著改善，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。健康促進生活方式總分對照組和試驗組不同時間點差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=5.595，P=0.002; F=8.605，P=0.000）。干預(yù)后1個月、6個月、12個月，對照組和試驗組健康促進生

13、活方式總分與干預(yù)前相比均顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2、陽虛體質(zhì)與平和體質(zhì)的血漿代謝組研究
　　采用PCA方法對陽虛體質(zhì)(n=20)與平和體質(zhì)(n=10)樣本建模，累計計算出9個主成分，模型參數(shù)R2X=0.966，Q2=0.743，模型分析了96.6％的原始數(shù)據(jù)，累計貢獻率為74.3％。兩組之間有分離趨勢，但存在部分交叉重疊，沒有完全區(qū)分開。對兩組樣本進一步建立OPLS-DA模型，最終計算出5個主成分，

14、模型參數(shù)R2X=0.812，R2Y=0.714，Q2=0.452。將VIP值＞1的變量的歸一化積分值進行統(tǒng)計學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)陽虛體質(zhì)組與平和體質(zhì)組血漿中潛在的差異代謝物有11個。
　　3、生活方式干預(yù)陽虛體質(zhì)的血漿代謝組研究
　　采用PCA方法對對照組干預(yù)前后（干預(yù)前n=10，干預(yù)后n=10）樣本建模，累計計算出4個主成分，模型參數(shù)R2X=0.968，Q2X=0.879，模型分析了96.8％的原始數(shù)據(jù)，累計貢獻率為87.9％。兩

15、組之間有所分離，進一步采用OPLS-DA方法建模。累計計算出2個主成分，模型參數(shù)R2X=0.783，R2Y=0.854，Q2X=0.771。
　　4、桂附地黃丸干預(yù)陽虛體質(zhì)的血漿代謝組研究
　　采用PCA方法對試驗組用藥前后（干預(yù)前n=10，干預(yù)后n=10）樣本建模，累計計算出4個主成分，模型參數(shù)R2X=0.896，Q2X=0.646，模型分析了89.6％的原始數(shù)據(jù)，累計貢獻率為64.6％。兩組之間有所分離，進一步采用OPL

16、S-DA方法建模。累計計算出2個主成分，模型參數(shù)R2X=0.732，R2Y=0.705，Q2X=0.550。
　　結(jié)論:
　　1、陽虛體質(zhì)潛在的分子標(biāo)志物有11個，其中乳酸、丙氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、3-羥基丁酸、α-葡萄糖水平降低，氧化三甲胺、膽堿、甘氨酸、肌醇、纈氨酸水平升高。表明陽虛體質(zhì)是一種以新陳代謝減緩，產(chǎn)能減少為表現(xiàn)的體質(zhì)類型，存在糖脂代謝、氨基酸代謝、三羧酸循環(huán)、神經(jīng)遞質(zhì)等代謝通路的改變。
　　2、健康促