大腸桿菌對(duì)消毒劑及抗菌藥物交叉耐藥機(jī)制的初步研究.pdf

1、由于抗菌藥物的長(zhǎng)期不合理使用，臨床中耐藥菌株不斷地出現(xiàn)，導(dǎo)致常用的有效抗菌藥物療效降低甚至失效，然而，細(xì)菌的耐藥現(xiàn)象并不只局限于抗生素，早已擴(kuò)展到了消毒劑。與耐抗生素菌株一樣，由于畜牧業(yè)、食品生產(chǎn)企業(yè)、醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)及社區(qū)家庭中廣泛地不合理地使用著消毒劑，抗消毒劑菌株也陸續(xù)出現(xiàn)。畜牧業(yè)中，養(yǎng)殖廠是應(yīng)用消毒劑最頻繁，使用量最大的場(chǎng)所，值得注意的是中低效消毒劑在低于最小殺菌濃度時(shí)，長(zhǎng)期使用亞致死劑量可能促進(jìn)細(xì)菌生態(tài)學(xué)變化，誘導(dǎo)其耐藥性的產(chǎn)生。

2、這種情況稱(chēng)為選擇性壓力，是細(xì)菌對(duì)消毒劑耐藥的主要原因。雖然其耐藥性嚴(yán)重程度尚不及抗菌藥物的耐藥性，但也值得引起人們的重視。本試驗(yàn)分別以臨床分離大腸桿菌和人工誘導(dǎo)的大腸桿菌作為研究對(duì)象，對(duì)消毒劑與抗菌藥物交叉耐藥機(jī)制進(jìn)行了初步研究，旨在為臨床使用消毒劑奠定理論基礎(chǔ)。
　　 1、臨床分離大腸桿菌對(duì)抗菌藥物與消毒劑交叉耐藥性分析
　　 將實(shí)驗(yàn)室鑒定保存的104株臨床分離大腸桿菌作為受試菌株，通過(guò)K-B紙法檢測(cè)受試菌株對(duì)氧氟沙星

3、、環(huán)丙沙星、慶大霉素、磺胺嘧啶等12中抗生素的耐藥情況。同時(shí)，采用體外抑菌試驗(yàn)進(jìn)行消毒劑（苯扎溴銨和醋酸氯己定）敏感性檢測(cè)。確定臨床菌株已對(duì)消毒劑有一定的耐藥性。
　　 結(jié)果:104株大腸桿菌對(duì)抗生素的耐藥率分別為氨芐西林87.5％氧氟沙星26.8％左氧氟沙星29.6％環(huán)丙沙星75％慶大霉素67.3％諾氟沙星29.6％氟啶酸24.3％洛美沙星11.5％氟羅沙星16.4％加替沙星19.7％磺胺嘧啶95.2％恩諾沙星20％;消毒劑對(duì)

4、臨床菌株的最小抑菌濃度明顯高于質(zhì)控菌株。
　　 結(jié)論:臨床分離菌株對(duì)抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性的同時(shí)對(duì)消毒劑也有一定的抗藥性。結(jié)果提示臨床中應(yīng)合理使用消毒劑，對(duì)消毒劑耐藥機(jī)制的研究應(yīng)該受到重視。
　　 2、臨床分離大腸桿菌消毒劑-磺胺耐藥基因qacE△1-sulⅠ的檢測(cè)
　　 利用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取104株受試菌株的DNA，以DNA樣品作為模板通過(guò)PCR方法檢測(cè)消毒劑-磺胺耐藥基因qacE△1-sulⅠ的存在

5、情況。
　　 結(jié)果:消毒劑-磺胺耐藥基因qacE△1-sulⅠ檢出率高達(dá)95.19％。
　　 結(jié)論:獸醫(yī)臨床中已經(jīng)存在了攜帶消毒劑耐藥基因的大腸桿菌，而且耐藥基因檢出率很高，提示臨床應(yīng)注意合理使用消毒劑。同時(shí)該基因同時(shí)編碼消毒劑與磺胺類(lèi)藥物的耐藥說(shuō)明消毒劑耐藥性與抗菌藥物耐藥性之間存在相關(guān)性，值得我們注意是qacE△1能夠編碼外排泵這為今后交叉耐藥機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)。
　　 3、人工誘導(dǎo)耐藥菌株對(duì)消毒劑和抗菌藥物

6、交叉耐藥性分析
　　 以大腸桿菌質(zhì)控菌ATCC25922作為研究對(duì)象，采用多步法分別以亞抑菌濃度(1/2MIC)的消毒劑和抗菌藥物為起點(diǎn)進(jìn)行體外誘導(dǎo)，得到耐藥性穩(wěn)定的菌株。通過(guò)體外抑菌試驗(yàn)檢測(cè)誘導(dǎo)前后消毒劑和抗菌藥物對(duì)受試菌株的最小抑菌濃度(MIC)變化情況。
　　 結(jié)果:苯扎溴銨和戊二醛誘導(dǎo)前后除自身耐藥外MIC變化最大的是土霉素增加500倍，其他抗菌藥物MIC也有較高程度的增加;抗菌藥物誘導(dǎo)前后消毒劑MIC變化最明顯

7、的是苯扎溴銨增加64倍，戊二醛MIC變化相對(duì)較小，同時(shí)其他抗菌藥物的MIC也發(fā)生了較大的變化。
　　 結(jié)論:單一藥物能夠誘導(dǎo)大腸桿菌產(chǎn)生多重耐藥性，人工誘導(dǎo)菌株對(duì)消毒劑產(chǎn)生耐藥性的同時(shí)對(duì)多種抗菌藥物產(chǎn)生了耐藥性，反過(guò)來(lái)也成立，這說(shuō)明細(xì)菌消毒劑耐藥與抗菌藥物耐藥存在相關(guān)性。
　　 4、誘導(dǎo)前后外排泵基因acrA、mdfA表達(dá)量的研究
　　 通過(guò)試劑盒提取受試菌株的RNA，轉(zhuǎn)錄成cDNA，利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)外

8、排泵acrA、mdfA基因mRNA表達(dá)水平，旨在說(shuō)明消毒劑與抗菌藥物交叉耐藥性與外排泵acrA、mdfA基因之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果:苯扎溴銨誘導(dǎo)菌株acrA表達(dá)量增加約3.6倍，mdfA基因表達(dá)量增加約1.9倍;戊二醛增加倍數(shù)相對(duì)較小;喹諾酮類(lèi)藥物環(huán)丙沙星誘導(dǎo)后菌株A環(huán)acrA基因表達(dá)量變化最大，約為ATCC25922的9.5倍，mdfA基因表達(dá)量增加約6倍;其他抗菌藥物增加倍數(shù)相對(duì)較小。
　　 結(jié)論:誘導(dǎo)前后大腸桿菌