雞△6脂肪酸脫氫酶基因啟動子區(qū)域多態(tài)性及基因時空表達的研究.pdf

1、營養(yǎng)與遺傳因素間存在密切的互作關(guān)系,營養(yǎng)遺傳學和營養(yǎng)基因組學是目前研究的熱點之一。△6脂肪酸脫氫酶是多不飽和脂肪生成的限速酶,而多不飽和脂肪酸在動物體內(nèi)發(fā)揮著重要的生物學功能,與人和動物脂肪酸代謝紊亂癥有關(guān),也可能是畜禽肉質(zhì)及其它經(jīng)濟性狀的重要決定因素。但目前該基因結(jié)構(gòu)尚不完全清楚,有關(guān)基因功能也尚未得到全面研究。
　　 因此,本試驗首先利用PCR和5’RACE技術(shù)克隆了FADS2基因的5’UTR,并確定準確的轉(zhuǎn)錄起始位點。其次

2、,應用混合DNA池測序技術(shù)對雞FADS2基因啟動子區(qū)域的變異位點進行了篩選,用PCR—RFLP技術(shù)分析了新篩選出的變異位點在固始雞-安卡雞F2代資源群中的群體遺傳特性,并與生長性狀、屠體性狀等經(jīng)濟性狀及血液生化指標等進行了關(guān)聯(lián)分析。另外,應用實時定量PCR對絲毛烏骨雞FADS2基因的時空表達進行了測定。主要結(jié)果如下:
　　 1、獲得了FADS2基因的完整5’UTR區(qū)域其長度為196bp,將雞FADS2的mRNA序列向5’端延伸了

3、48bp。通過生物信息學分析發(fā)現(xiàn)該基因轉(zhuǎn)錄起始位點上游28～22bp具有TATA框,其-641bp～+200bp區(qū)域內(nèi)存在一個典型的CpG島,另有重要的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點。
　　 2、在雞FADS2啟動子區(qū)域新發(fā)現(xiàn)了9個突變位點。應用內(nèi)切酶AluⅠ、HhaⅠ對其中的2個SNP(C-958T,C-725T)在F2代資源群中的遺傳多態(tài)性進行了檢測。群體遺傳學表明:在C-958T位點,C、CC分別是優(yōu)勢等位基因和優(yōu)勢基在型;該位點屬于中

4、度多態(tài)(0.3308),并處于哈代-溫伯格平衡狀態(tài)。在C-725T位點,C、CC分別是優(yōu)勢等位基因利優(yōu)勢基因型；該位點為低度多態(tài)(0.0891),不符合哈代-溫伯格平衡。
　　 關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明,C-958T位點突變與體重、脛圍、體斜長、胸寬、胸深、屠體重、肝臟重、肌胃重、脾臟重,血液中的谷草轉(zhuǎn)氨酶、葡萄糖、甘油三酯、乳酸脫氫酶顯著相關(guān)(P<0.05)。C-725T位點突變與心臟率、肌胃率、腿肌率、血液中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、總膽固醇,

5、肌肉中的C22:3及C22:4顯著相關(guān)(P<0.05)。
　　 3、在對烏雞公雞1日齡,4、8、12周齡的肝臟、心臟、肌肉的的FADS2的表達研究發(fā)現(xiàn),FADS2在肝臟中1日齡的表達量顯著低于4、8、12周齡的表達量,心臟、肌肉在1日齡,4、8、12周齡的表達量差并不顯著；而同一時間段不同組織的FADS2表達量來說,在1日齡各組織的表達量差異并不顯著,而4、8、12周齡的肝臟表達量顯著高于心臟、肌肉的表達量。心臟與肌肉在各階段的

6、表達量差異并不顯著。
　　 由以上試驗結(jié)果,可得出如下結(jié)論
　　 1、雞FADS2基因準確的轉(zhuǎn)錄起始位點在ATG上游為196bp處。該基因啟動子預測為強啟動子。
　　 2、雞FADS2基因啟動子區(qū)域遺傳變異豐富。其中C-958T位點與較多的生長性狀、屠體性狀及血液生化指標顯著關(guān)聯(lián),而C-725T則與部分屠體性狀、血液生化指標及肌肉中多不飽和脂肪酸顯著相關(guān)。有望作為育種的分子標記輔助選擇。
　　 3、絲毛烏