Cajal間質(zhì)細(xì)胞在膽囊結(jié)石形成中的作用以及保膽取石術(shù)方法學(xué)研究.pdf

1、目的：1、膽囊結(jié)石是一種常見的消化系統(tǒng)疾病。膽囊結(jié)石的成因復(fù)雜，膽囊運(yùn)動(dòng)功能異常是一個(gè)關(guān)鍵的因素。最新的研究表明ICC存在于動(dòng)物和人類膽囊，其對膽囊動(dòng)力的調(diào)控以及與膽囊結(jié)石發(fā)病的關(guān)系成為了研究熱點(diǎn)。在構(gòu)建兔膽囊膽固醇結(jié)石模型的基礎(chǔ)上，通過一系列體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)，對膽囊結(jié)石形成過程中膽囊收縮功能與ICC的變化關(guān)系以及相關(guān)原因和機(jī)制進(jìn)行探討，為膽囊結(jié)石的病因研究和預(yù)防提供新的理論依據(jù)。2、膽囊切除被認(rèn)為是治療膽囊結(jié)石的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是術(shù)后多種并

2、發(fā)癥以及膽囊切除后對人體生理機(jī)能的影響，使得一些專家對此進(jìn)行了反思，提出了“新式的微創(chuàng)保膽取石手術(shù)”。但經(jīng)過多年的臨床實(shí)踐，專家們發(fā)現(xiàn)該術(shù)式在適應(yīng)癥及技術(shù)操作標(biāo)準(zhǔn)等方面仍有一些細(xì)節(jié)值得改進(jìn)和規(guī)范。根據(jù)ICC在膽囊的分布特點(diǎn)，對保膽取石手術(shù)的方法學(xué)進(jìn)行探索研究，取得了初步結(jié)果。
　　方法：(1)52只新西蘭大白兔隨機(jī)分為對照組20只，實(shí)驗(yàn)組32只，分別予以普通飼料和致石飼料喂養(yǎng)，6周后行B超檢查成石情況。核素掃描評(píng)估膽囊收縮功能;多

3、導(dǎo)生理記錄儀檢測在體膽囊基本電節(jié)律和膽囊肌條對CCK反應(yīng)張力的改變。免疫熒光全層鋪片計(jì)數(shù)膽囊ICC變化;電鏡觀察ICC超微結(jié)構(gòu)改變。Western Blot檢測膽囊c-kit蛋白表達(dá)。(2)全自動(dòng)生化儀檢測兩組膽汁膽固醇飽和指數(shù)、膽囊組織氧化應(yīng)激指標(biāo)，TUNEL染色觀察兩組膽囊ICC凋亡的變化。用不同濃度的膽固醇對ICC進(jìn)行干預(yù)，通過細(xì)胞膜片鉗、流式細(xì)胞儀等檢測ICC起搏電位、氧化應(yīng)激和凋亡的變化。隨后在含100mg/L膽固醇的培養(yǎng)基加

4、入不同濃度的膽固醇清除劑甲基-β-環(huán)糊精對ICC進(jìn)行干預(yù)后，檢測ICC起搏電位、氧化應(yīng)激和凋亡的變化。
　　結(jié)果：B超檢測實(shí)驗(yàn)組兔膽囊成石率為74.2％(23/31)。核素掃描結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組膽囊收縮功能較對照組明顯下降。實(shí)驗(yàn)組膽囊基本電節(jié)律的頻率和振幅和膽囊肌條對CCK反應(yīng)張力明顯低于對照組。膽囊全層鋪片免疫熒光檢測示實(shí)驗(yàn)組ICC數(shù)目明顯少于對照組。結(jié)石膽囊ICC超微結(jié)構(gòu)發(fā)生線粒體腫脹、自噬小體形成、細(xì)胞核內(nèi)陷、染色質(zhì)邊集等病理

5、改變。Westen Blot顯示結(jié)石膽囊組織c-kit蛋白表達(dá)低于正常膽囊。(2)成石膽汁膽固醇飽和指數(shù)明顯高于對照組。結(jié)石膽囊組織氧化應(yīng)激指標(biāo)顯著高于正常膽囊。全層鋪片CD117/TUNEL免疫熒光雙染顯示正常膽囊組織有極少ICC凋亡，而結(jié)石組ICC凋亡明顯增多。體外試驗(yàn)中，成功對膽囊原代ICC進(jìn)行了分離、培養(yǎng)和純化，純化率約為85％。隨著甲基-β-環(huán)糊精濃度的增加，對細(xì)胞結(jié)合膽固醇清除的增多，ICC起搏電流的振幅和頻率逐漸恢復(fù)、氧化

6、應(yīng)激反應(yīng)逐漸減弱;ICC凋亡率逐漸降低，呈劑量依耐性變化，各組間比較差異均有顯著性(P＜0.05)。
　　結(jié)論：(1)飲食誘導(dǎo)兔膽囊膽固醇結(jié)石形成過程中，膽囊ICC明顯減少，膽囊運(yùn)動(dòng)功能下降；(2)成石膽汁中膽固醇過飽和誘發(fā)膽囊組織氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致膽囊ICC凋亡；(3)高膽固醇影響膽囊ICC電生理活動(dòng)，使ICC起搏電位減弱，妨礙了膽囊平滑肌基本電節(jié)律的產(chǎn)生，介導(dǎo)了膽囊收縮功能減弱；(4)保膽取石手術(shù)有嚴(yán)格的適應(yīng)癥和禁忌癥，其遠(yuǎn)期