細胞重編程因子在肝癌細胞系中的表達及其效應.pdf

1、細胞重編程(reprogramming)是指成體細胞通過改變其分化狀態(tài),形成包括干細胞在內(nèi)的不同類型的細胞。Yamanaka和他的團隊發(fā)現(xiàn)通過過表達四種轉錄因子,皮膚細胞就能被誘導成多能干細胞,從而把它們命名為誘導多能干細胞(inducedpluripotentstemcells,iPS細胞或iPSCs),這四種轉錄因子因此被稱為Yamanaka因子[1]。通過直接重編程獲得的人iPSCs能夠用于組織修復和替換,這樣避免了免疫排斥和倫理

2、學問題。而且,因為這些細胞能夠由取自病人自身的細胞重編程獲得,所以有助于在體外建立病人自身的疾病模型和候選藥物篩選模型,這一新技術給基于干細胞的個性化治療和再生醫(yī)學帶來了光明的前景。但是,目前細胞重編程的誘導效率仍然很低。使用腫瘤細胞是否能夠提高重編程的誘導效率,以及重編程對腫瘤細胞有何影響,這些問題均有待闡明。
　　本課題通過反轉錄PCR檢測Huh7、SMMC-7721、HepG2等肝癌細胞系中四種Yamanaka因子Oct3/

3、4、Sox2、Klf4和c-Myc的mRNA水平,通過Westernblot方法檢測上述因子在蛋白質(zhì)水平的表達;應用pLenti6.3/V5Gateway慢病毒系統(tǒng),構建Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc的慢病毒表達載體;慢病毒載體介導上述轉錄因子共表達于肝癌細胞系,觀察其對細胞狀態(tài)的影響。實驗結果表明,四種Yamanaka因子在肝癌細胞系中均有不同程度表達,mRNA和蛋白質(zhì)水平的檢測結果一致;成功構建了Yamanaka因子的

4、慢病毒表達載體,并包裝成為具有感染能力的慢病毒顆粒;慢病毒介導Yamanaka因子在肝癌Huh7等細胞中共表達后,獲得了iPS樣細胞。上述研究結果提示,通過過表達Yamanaka因子,腫瘤細胞有可能發(fā)生重編程,轉變?yōu)閕PS樣細胞。在這一過程中,各種Yamanaka因子的相對表達水平對于iPS細胞的誘導非常重要,探討其中的規(guī)律,將為提高iPS細胞的誘導效率提供理論依據(jù)。本研究為肝癌細胞來源的iPS細胞的建立,以及通過細胞重編程逆轉肝癌的惡