豚鼠真菌性皮膚病模型的建立及致病機(jī)理初探.pdf

1、犬真菌性皮膚病是由真菌黏附于犬表皮及附屬結(jié)構(gòu)引起的，真菌在附著之后對(duì)角質(zhì)蛋白組織寄生或腐生從而迅速繁殖，最終導(dǎo)致局部皮膚出現(xiàn)脫毛、鱗屑、糜爛等病變。淺層真菌是犬真菌皮膚病的主要病原體，基本為皮膚癬菌，可分為毛癬菌屬（如須癬毛癬菌）、表皮癬菌屬（如絮狀表皮癬菌）和小孢子菌屬（如犬小孢子菌、石膏樣孢子菌）三個(gè)屬，馬拉色菌等少數(shù)酵母菌也可以導(dǎo)致發(fā)病。該病在各類型犬只和各個(gè)地區(qū)均常發(fā)生，多為條件致病性疾病，種類多樣，治療期較長(zhǎng)，治愈率不高。近年

2、來其發(fā)病率的增加可能和寵物臨床抗生素及免疫抑制劑使用量過大有關(guān)。人類也可能被犬傳染上該疾病，在抵抗力低下的特殊人群里該病發(fā)生率正在上升。
　　對(duì)犬真菌性皮膚病的相關(guān)研究是動(dòng)物醫(yī)學(xué)界目前的科研熱點(diǎn)，但是相關(guān)工作往往直接使用犬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，具有價(jià)格高、操作復(fù)雜、對(duì)操作人員造成人身威脅等缺點(diǎn)，本試驗(yàn)嘗試建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型模擬犬真菌性皮膚病病變以求改善相關(guān)缺點(diǎn)。相關(guān)研究多集中于該病的診斷和防治，很少涉及致病機(jī)理方面的研究，本試驗(yàn)嘗試探索在實(shí)

3、驗(yàn)動(dòng)物機(jī)體內(nèi)免疫系統(tǒng)與病原的相互作用，或能對(duì)其致病機(jī)理有初步的了解。
　　試驗(yàn)一:須毛癬菌皮膚病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立
　　為了制作安全、方便、可靠的真菌性皮膚病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型以替代犬投入相關(guān)試驗(yàn)，采用在動(dòng)物背部接種須毛癬菌菌懸液的方法建立了小鼠和豚鼠兩種動(dòng)物的須毛癬菌皮膚病模型，每間隔1d觀察局部皮膚病變癥狀并評(píng)分，在接種真菌后第3d、第13d、第26 d制作局部皮膚石蠟病理切片。為了了解機(jī)體免疫狀態(tài)對(duì)真菌致病的影響，在接種前分

4、別使用地塞米松和黃芪多糖作為免疫抑制劑與免疫加強(qiáng)劑注射動(dòng)物進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果顯示，全部豚鼠及86.7％的地塞米松組小鼠須毛癬菌再培養(yǎng)呈現(xiàn)陽(yáng)性，建模成功。須毛癬菌對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚的侵害作用在接種真菌后13 d-17d逐漸達(dá)到最高峰，并在之后逐漸減輕癥狀。豚鼠的病變癥狀明顯而直觀，癥狀較重，而小鼠的病變癥狀較淺。黃芪多糖組的感染豚鼠對(duì)比免疫抑制組豚鼠皮膚病變癥狀評(píng)分減少。該試驗(yàn)初步證明須毛癬菌實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型是可行的，動(dòng)物機(jī)體的免疫狀態(tài)對(duì)須毛癬菌感染

5、造成影響，感染后半個(gè)月左右為病變最嚴(yán)重時(shí)期。
　　試驗(yàn)二:體外藥敏試驗(yàn)和療效試驗(yàn)
　　為了確定須毛癬菌皮膚病豚鼠模型應(yīng)用于抗真菌藥物療效學(xué)試驗(yàn)的可行性，先以棋盤微量稀釋方法進(jìn)行了須毛癬菌對(duì)兩性霉素B、特比萘芬、伊曲康唑以及后兩種藥物聯(lián)合用藥的體外藥敏試驗(yàn)，以肉眼進(jìn)行評(píng)判，再在豚鼠模型上用藥進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)估，結(jié)果顯示聯(lián)合用藥的MIC值最低，須毛癬菌消除率最高，癥狀總積分減少最多，初步判定藥物療效在動(dòng)物試驗(yàn)和體外藥敏試驗(yàn)中基本一致

6、，該模型可用于相關(guān)研究。
　　試驗(yàn)三:相對(duì)熒光定量PCR法檢測(cè)細(xì)胞因子
　　為了了解動(dòng)物機(jī)體免疫系統(tǒng)在真菌感染后的變化情況，探究真菌皮膚病致病機(jī)理，采取須毛癬菌皮膚病模型豚鼠第3d、第13d、第26 d的血液，用相對(duì)熒光定量PCR方法檢測(cè)血液總IL-10、IL-1、TNF-α、IFN-γ四種細(xì)胞因子的含量，發(fā)現(xiàn)Th2細(xì)胞因子IL-10在感染須毛癬菌后第3d升高，提示動(dòng)物機(jī)體在剛受到感染時(shí)處于免疫抑制狀態(tài)，而Th1細(xì)胞因子IL